色譜分離原理

按色譜法分離所依據的物理或物理化學性質的不同，又可將其分為：

吸附色譜法：利用吸附劑表面對不同組分物理吸附性能的差別而使之分離的色譜法稱為吸附色譜法。適于分離不同種類的化合物(例如，分離醇類與芳香烴)。

分配色譜法：利用固定液對不同組分分配性能的差別而使之分離的色譜法稱為分配色譜法。

離子交換色譜法：利用離子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法，利用被分離組分與固定相之間發生離子交換的能力差異來實現分離。離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應用于無機離子的分離，而且廣泛地應用于有機和生物物質，如氨基酸、核酸、蛋白質等的分離。

尺寸排阻色譜法：是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法，體積大的分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻，較早的淋洗出來；中等體積的分子部分滲透；小分子可完全滲透入內，最后洗出色譜柱。這樣，樣品分子基本按其分子大小先后排阻，從柱中流出。被廣泛應用于大分子分級，即用來分析大分子物質相對分子質量的分布。

親和色譜法：相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相，利用與固定相不同程度的親和性，使成分與雜質分離的色譜法。例如利用酶與基質(或抑制劑)、抗原與抗體，激素與受體、外源凝集素與多糖類及核酸的堿基對等之間的專一的相互作用，使相互作用物質之一方與不溶性擔體形成共價結合化合物，用來作為層析用固定相，將另一方從復雜的混合物中選擇可逆地截獲，達到純化的目的。可用于分離活體高分子物質、過濾性病毒及細胞。或用于對特異的相互作用進行研究。
吸附色譜利用固定相吸附中心對物質分子吸附能力的差異實現對混合物的分離，吸附色譜的色譜過程是流動相分子與物質分子競爭固定相吸附中心的過程

吸附色譜的分配系數表達式如下：

K_a =\frac

其中[Xa]表示被吸附于固定相活性中心的組分分子含量，[Xm]表示游離于流動相中的組分分子含量。分配系數對于計算待分離物質組分的保留時間有很重要的意義。