色譜常見疑難雜癥詳解（一）

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　　1、用HPLC進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在?如何解決?

　　答：關于漂移問題：a、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定;b、流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等;c、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡。

　　關于快速變化問題：a、流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定;b、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出;c、流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合。

　　2、色質聯用中毛細柱的選擇應注意什么問題?

　　答：柱效要高、熱穩定性好、化學惰性強。

　　具體選擇應注意：a、柱極性：根據分析樣品選擇不同極性的柱子進行分析;b、柱子內徑：內徑大小決定柱容量;c、液膜厚度：分析樣品溫度一不一樣，對膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄;d、柱長度：柱越長，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問題，柱子過長，分析時間長，因此要根據樣品考慮柱子長度;e、外涂層(柱體)的選擇;f、另外還有儀器型號、分析對象等因素。

　　3、液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么?

　　答：a、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子;b、存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。

　　4、從那些方面可以簡單判別毛細管柱子的熱穩定性好壞?

　　答：a、分配容量(或容量因子)K：好的柱子在高溫運行后，分配容量K不應有明顯的下降，否則，說明柱子的熱穩定性不好;b、理論塔板數n：熱穩定性好的柱子經受高溫后，理論塔板數應基本保持恒定;c、柱子的極性：熱穩定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現為保留指數I值沒有大的變化;d、噪聲：熱穩定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加;e、柱子的去活層：毛細管柱子涂固定液前內部一般要用去活性試劑去活以增加惰性，質量好的毛細管柱子高溫后，去活層不應該變化，表現在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。

　　5、為什么進樣器內的玻璃襯套會對色譜行為造成影響?

　　答：進樣器內的玻璃襯套主要有下列作用：a、提供一個溫度均勻的汽化室，防止局部過熱;b、玻璃的惰性不如不銹鋼好，減少了在汽化期間樣品分解的可能性;c、易于拆換清洗 ，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發性組分會逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會慢慢分解，使基流增加，噪聲增大，通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響;d、可根據需要選擇管壁厚度及內徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個進樣加熱塊。從以上幾個方面可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因。

　　6、毛細管色譜分流進樣時，非線性分流的主要原因是什么?

　　答：a、進樣器溫度太低，樣品汽化不完全，發生分級分流;b、進樣器溫度太高，某些組分可能發生熱分解，也有的樣品可能發生催化分解，或樣品部分地被吸附在進樣器內表面上;c、在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分;d、系統的進樣墊，柱接頭等地方漏氣。

　　7、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法?

　　答：a、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量;b、樣品未從柱子中流出：可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子;c、樣品與檢測器不匹配：根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器;d、檢測器衰減太多：調整衰減即可;e、檢測器時間常數太大：解決辦法為降低時間參數;f、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗;g、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣;h、記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可;i、流動相流量不合適：調整流速即可。檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。