色譜柱如何驗收

　　實驗室如何對儀器驗收，以常規高效液相色譜儀（HPLC）為例，給出進行驗收時需要核查的儀器模塊、核查參數、典型的可接受標準，對每個儀器模塊和參數核查提供了相應的核查方法。表中所列技術指標僅供參考，實驗室本身需求確定儀器核查的項目參數，并設定參數的可接受限。

　　HPLC驗收核查表

　　E.1 泵

　　E.1.1 泵耐壓

　　將儀器各部分連接好，以 100%甲醇（或純水）為流動相，流量為 0.2 mL/min，

　　按說明書啟動儀器，壓力平穩后保持 10 min，用濾紙檢查各管路接口處是否有濕

　　劑。卸下色譜柱，堵住泵出口端（壓力傳感器以下），使壓力達到最大允許值的

　　90%，保持 5 min 應無泄露。

　　E.2 自動進樣器

　　在樣品盤上均勻選取 10 個點，將樣品瓶加 1mL 純水，分別放置在這 10 個

　　點上，鉑電阻置于樣品瓶內。溫度穩定 30 min 后開始測量，設定值與 10 個點的

　　溫度平均值的差值即為溫度準確性。設定溫度可選取 10 ℃ 和 40 ℃ ，或依據儀器

　　條件或實驗要求進行選擇。

　　E.3 柱溫箱

　　將溫度計探頭放置在柱溫箱中部，分別測試 40 ℃ 和最高可控溫度的 90%處的溫度值，每 10 分鐘記錄一次，記錄 7 次，共計 60 分鐘，計算平均值。設定值與平均值之差即為柱溫準確度。在 40 ℃ 下，7 次測量值的最大值與最小值之差即為柱溫穩定性。

　　E.4 檢測器

　　E.4.1 紫外 -可見光檢測器及二極管陣列檢測器

　　E.4.1.1 波長示值誤差與波長重復性

　　在儀器內置波長準確度和調整的測試程序時，優先按照儀器自帶測試程序進

　　行檢測；在無自帶測試程序時，選用標準溶液進行檢測。方法如下：

　　流動相：15%乙腈-水溶液；色譜柱：RP18，5 μm 30-50 x2,1-4.6 mm 或者 2.0m×0.12 mm ID 毛細管柱；柱箱溫度：40 ℃ ；流速：1.0 mL/min（使用 15％的乙腈-水溶液）；注射量：20 μL。

　　用注射器將紫外標準溶液重鉻酸鉀（標準波長 235 nm，257 nm， 313 nm 和350 nm）從檢測器入口注入樣品池中沖洗，并將池充滿，將檢測器波長調到低于標準波長 5 nm 處，調檢測器波長，每 10 s 改變 1 nm，工作站記錄所得到的折線，折線的最高點（或最低點）對應的波長與標準溶液波長之差為波長示值誤差。每個波長重復測量 3 次，其中最大值與最小值之差為波長重復性誤差。

　　用注射器將紫外標準溶液咖啡因（標準波長 273 nm）從檢測器入口注入樣品池中沖洗，并將池充滿，將檢測器波長調到低于標準波長 5 nm 處，調檢測器波長，每 10 s 改變 1 nm，工作站記錄所得到的折線，折線的最高點（或最低點）對應的波長與標準溶液波長之差為波長示值誤差。每個波長重復測量 3 次，其中最大值與最小值之差為波長重復性誤差。

　　有吸光值顯示的檢測器，改變波長時可直接讀出吸光度值，其最大（或最小）吸光值對應的波長與參考波長之差為波長示值誤差。有波長掃描功能的儀器可畫出標準溶液的光譜曲線，其波峰（或波谷）對應的波長與參考波長之差為波長示值誤差。對于有內置標準濾光片可進行自檢的儀器可直接采用其測量數據。

　　E.4.1.2 基線噪聲

　　將輸液泵與檢測器的“入口”相連，檢測器的信號輸出端與色譜數據工作站（或記錄儀）連接，流動相為二次蒸餾水，泵流量設定 1.0 mL/min，運行系統，記錄基線 1 h。

　　開機預熱后，記錄基線 1 h。選取所記錄基線中噪聲較大的 5min 作為計算噪聲的基線，以 1 min 為界畫平行包絡線，按公式（4）計算基線噪聲。5 個平行包絡線寬度的平均值，作為檢測器基線噪聲。

　　E.4.1.3 基線漂移

　　將輸液泵與檢測器的“入口”相連，檢測器的信號輸出端與色譜數據工作站（或記錄儀）連接，流動相為二次蒸餾水，泵流量設定 1.0 mL/min，運行系統，記錄基線 1 h。

　　開機預熱后，記錄基線 1 h（如圖 5 所示），取 1 h 內平行包絡線的中心線的

　　起點與終點的差值為檢測器基線漂移。

　　E.4.2 熒光檢測器

　　E.4.2.1 波長示值誤差和重復性

　　1. 連續波長：萘-甲醇 290 nm（激發），330 nm（發射）注入 1×10-7g/ml 萘-甲醇標準物質，沖洗檢測池并將其充滿。調整激發波長為 290 nm，發射 325 到335 nm，每 5 s 到 10 s 改變 1 nm，記錄每個波長下的吸收值，曲線最高點對應的波長與參考值波長之差為發射波長的示值誤差

　　2. 使用去離子水，調整波長 350nm，397nm。

　　E.4.2.2 基線噪聲

　　開機預熱后，記錄基線 1 h。選取所記錄基線中噪聲較大的 5 min 作為計算噪聲的基線，以 1 min 為界畫平行包絡線（如圖所示），按公式計算基線噪聲。5 個平行包絡線寬度的平均值，作為檢測器基線噪聲。將輸液泵停止運行（此時檢測池內充滿二次蒸餾水），記錄靜態基線 5 min，計算短期基線噪聲。

　　E.4.2.3 基線漂移

　　將輸液泵與檢測器的“入口”相連，檢測器的信號輸出端與色譜數據工作站（或記錄儀）連接，流動相為二次蒸餾水，泵流量設定 1.0 mL/min，運行系統，記錄基線 1 h。開機預熱后，記錄基線 1 h，取 1 h 內平行包絡線的中心線的起點與終點的差值為檢測器基線漂移。

　　E.4.3 示差折光檢測器

　　E.4.3.1 基線噪聲

　　開機預熱后，記錄基線 1 h。選取所記錄基線中噪聲較大的 5 min 作為計算

　　噪聲的基線，以 1 min 為界畫平行包絡線（如圖 4 所示），按公式（4）計算基線

　　噪聲。5 個平行包絡線寬度的平均值，作為檢測器基線噪聲。將輸液泵停止運行

　　（此時檢測池內充滿二次蒸餾水），記錄靜態基線 5 min，計算短期基線噪聲。

　　E.4.3.2 基線漂移

　　將輸液泵與檢測器的“入口”相連，檢測器的信號輸出端與色譜數據工作站（或記錄儀）連接，流動相為二次蒸餾水，泵流量設定 1.0 mL/min，運行系統，記錄基線 1 h。開機預熱后，記錄基線 1 h，取 1 h 內平行包絡線的中心線的起點與終點的差值為檢測器基線漂移。

　　E.4.4 蒸發光檢測器

　　E.4.4.1 基線噪聲

　　選用 C18 色譜柱，將儀器各部分連接好，以甲醇為流動相，流量為 1.0 mL/min，

　　漂移管溫度 70 ℃ （低溫型 35 ℃ ），霧化氣體流量為（2.5～3.0）L/min 或適當的氣

　　體壓力（280～350）kPa，靈敏度選擇在適當的擋位，接通電源，待儀器穩定后

　　記錄基線 1 h，計算參照示差檢測器。

　　E.4.4.2 基線漂移

　　計算參照示差檢測器。