色譜法如何檢測膨化食品中合成色素

　　國標GB／T 5009.35—2003食品中合成色素的檢驗方法有高效液相色譜法、薄層色譜法、示波極譜法。高效液相色譜法由于具有靈敏度高、分離好、快速等特點，已被廣泛使用。目前國標法尚未有對膨化食品的合成色素進行檢測方法。以下介紹適合于膨化食品中食用合成色素的檢測方法。

　　料與方法

　　1.材料與儀器

　　檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍標準溶液，均購自中國計量科學院，濃度為0.5mg／mL；α一淀粉酶(≥500U／mg，Sigma)，甲醇(色譜醇)、乙醇、乙酸銨、檸檬酸、石油醚、甲酸和氨水，均為國產分析純；聚酰胺粉：100—200目；超純水由milli—Q水純化設備自制；膨化食品(市售)。

　　Waters2695型高效液相色譜儀美國Waters公司；高速冷凍離心機Sartorius公司；恒溫搖床Thermo公司；水浴鍋。

　　實驗方法

　　1.樣品的前處理

　　稱取粉碎的樣品59(精確到0.01g)，放入50mL的離心管中。加入30mL石油醚渦旋3min，放置片刻，棄去石油醚。反復處理數次至石油醚變澄清為止，于水浴上揮干石油醚。加pH=6的水30mL渦旋使樣品懸浮起來。然后加入2000Uα-淀粉酶(酶活力：1000U／mL；最適溫度60℃；最適pH為5～7)放人溫度為60攝氏度，轉速200r／min恒溫搖床中加熱20min，然后將試液放入離心機，于8000r／min離心5min，取上清液移人150 mL燒杯，將離心后的殘渣用少量水反復提取至上清液無色為止，所得水洗液合并入燒杯中。

　　2.樣品凈化

　　將上述樣品溶液用20%檸檬酸溶液調節pH到4，放入水浴鍋中加熱到60℃。將lg聚酰胺粉加少量水調成糊狀，倒入樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃pH=4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸(6+4)混合溶液洗滌3～5次，每次10mL。再用水洗至中性。用乙醇-氨水-水(7+2+1)混合溶液解吸數次至洗脫液無色為止，每次5mL，將收集的解吸液用36%乙酸溶液調節至中性，水浴加熱至近干。加水定容至5mL。經0.451.tm微孔濾膜過濾，取lOul在高效液相色譜儀上進行測定。

　　3.測定

　　色譜條件色譜柱：Waters Symmey ShieldCl8(4.6×250mm，51xrn)；流動相：A為甲醇，B為0.02mogL乙酸銨；線性梯度洗脫：0～15min，A相10%～98%；流速：1.OmL／min；柱溫：30℃；進樣量：101.tL；波長：254nm；PDA采集波長光譜檢測范圍為200nm～700nm。

　　標準系列溶液的配制稱取適量檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍標準溶液用超純水溶解配制為每毫升相當于1.0、5.0、10.0、20.0、50.0pg混合標準系列溶液。將混合標準系列溶液，在上述色譜條件下進行測定，以標準系列溶液濃度為橫坐標(x)、相應的峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，繪制標準曲線。