艾滋病幾種檢測方法的研討

艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合癥，由感染“HIV”病毒引起。HIV是一種能攻擊人體免疫系統的病毒，它可以侵襲人的免疫體系，并終極損壞人體的免疫功效。隨著人體免疫力的下降，人會越來越頻繁地感染上各種致病微生物，而且感染的水平也會變得越來越來重，終極會因各種復合感染而導致逝死亡。艾滋病嚴重威脅人類的身心健康，當我們出現一些異樣的癥狀后，應該選擇什么樣的檢測方法，怎樣確診自己是否患有艾滋病就顯得格外重要。按規定的檢測程序對艾滋病的檢測方法研討如下。
        1材料和方法
        1.1材料：選取我院臨床初篩檢測病例72例，其中男性40例，女性32例。年齡28-63歲，平均39歲。
        1.2臨床癥狀：初期的開始癥狀像傷風、流感、全身疲勞無力、食欲減退、發熱、體重減少、隨著病情的加重，癥狀日見增多，如皮膚、粘膚出現白色念球菌感染，單純皰疹、帶狀皰疹、紫斑、血腫、血皰、滯血斑、皮膚容易損傷，傷后出血不止等。
        1.3方法：目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是艾滋病初篩實驗室常規使用的方法
        1.3.1酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。在一些特殊情況下，當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。
        1.3.2明膠顆粒凝集法（PA）：它是快速、簡便的一種篩選方法。PA的基本過程是先將樣品稀釋，然后分別加入經抗原致敏的和未致敏的明膠顆粒，混勻后保溫(一般為室溫)。當血清中有HIV抗體存在時，經抗原致敏的明膠顆粒與抗體發生抗原抗體反應，根據明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結果。PA操作簡便,無需特殊儀器設備,適合對少量標本的檢測。是對大量人群初篩實驗使用的方法，例公民義務獻血的初篩檢測。
        1.3.3免疫熒光試驗(IFA)：基本原理為應用Ｈ9或HUT78培養細胞作為載體，用HIV感染細胞,該細胞內就會含有HIV抗原,將HIV感染的淋巴細胞涂于玻片上固定，制備為抗原片，加入待檢血清，待檢血清中的抗 HIV抗體與抗原結合后，再與熒光素標記的抗人Ig結合，在熒光顯微鏡下可見到細胞內有黃綠色熒光。
        1.3.4免疫印跡試驗：主要用于確認試驗，基本原理是HIV全病毒抗原經過SDSPAGE電泳，將分子量大小不等的蛋白帶分離開來，然后再把這些已經分離的不同蛋白帶電轉移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀，每一條硝酸纖維素膜上均含有經電泳分離過的HIV病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100，再把它直接加到硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應,血清中若含有抗HIV抗體，就會與膜條上的抗原帶相結合并呈現紫褐色。此確認實驗室是初篩陽性的標本送檢省疾控的HIV確認實驗室或市疾控的HIV中心實驗室進行的。

 1.3.5病毒核酸檢測：是通過檢測HIV RNA水平來反映病毒載量，具有很高的靈敏度，使用適時熒光聚合酶鏈反應(PCR)技術，能夠在HIV感染的前2周檢測到病毒核酸。病毒核酸檢測方法可用于HIV的早期診斷，如窗口期輔助診斷、病程監控、指導治療方案及療效測定、預測疾病進程等。目前常用的測定方法有逆轉錄PCR實驗(RT PCR)、核酸序列擴增實驗(NASBA)、分支DNA雜交實驗(bDNA)等。使用高靈敏度的適時熒光PCR技術，能夠在HIV感染的前2周檢測到病毒核酸。此種檢測是在HIV感染確診之后，判定使用抗病毒藥物的檢測指標，現在可有省疾控中心的艾滋病檢測實驗室完成。
        2結果
        經過我院的檢測和分析后，14例送檢經確認實驗，未確診艾滋病感染。
        3討論
        近年來，HIV檢測技術取得了很大進展，但是仍有不足的地方。例如ELISA法第四代試劑增加了P24抗原的檢測， p24抗原檢測能夠在病毒開始復制后檢測到血液中的可溶性p24抗原，但易出現假陽性。因此，陽性結果必須經中和試驗確認，該結果才可作為HIV感染的輔助診斷依據。還有病毒核酸檢測方法具有很高的靈敏度，對疾病進展的監測、抗病毒療效觀察和耐藥性監測非常重要。但是，由于HIV基因的多樣性，沒有一套引物可以覆蓋所有的HIV序列，使檢測的敏感性又受到限制。
        HIV感染的診斷是艾滋病預防控制工作的重要組成部分，建立敏感實用的檢測方法對于監測、診斷或血液篩查，控制艾滋病的流行顯得尤為重要。總結以上討論的檢測方法，我們得出的結論是，既要提高檢測的敏感性、特異性，縮短窗口期，又要簡便、快速和降低成本已成為HIV檢測技術發展的要求和方向，很多的研究正致力于尋找病毒檢測的替代技術。
參考文獻
[1]曹韻貞         我國艾滋病的現狀         中國抗感染化療雜志 2002,2(2):65 66
[2]沈霞          艾滋病的實驗室診斷        中華檢驗醫學雜志 2003,26（5）：327 328