艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測:檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法,一般要經過兩個步驟:首先做初篩試驗,如果為陽性,再做確認試驗,確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有:
1病原檢測
病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由于前兩種方法難度大,且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄-PCR)可用于臨床診斷。
2抗體檢測
血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍,可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑
篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot(WB),由于該法相對窗口期較長,靈敏度稍差,而且成本高昂,因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高,WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。
FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗(IFA)。IFA比WB的成本低,而且操作也相對簡單,整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果,而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為準,但不作為血液合格的標準。
4篩檢試驗
篩檢試驗主要用于對供血員進行篩查,因此要求操作簡便,成本低廉,而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA,還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。
ELISA有很高的靈敏度和特異性,操作簡單,僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用,特別適合于試驗室大規模篩檢使用。
顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便,成本低廉的檢測方法,該方法結果可通過肉眼判定,靈敏度很高,特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用,缺點是必須使用新鮮樣品,特異性較差。
80年代后期發展起來的斑點印跡檢測(Dot-blot assay)是一種快速ELISA(Rapid ELISA)方法,這種方法操作極為簡便,過程短暫,整個過程多數在5-10分鐘內甚至3分鐘內即可結束,但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。
金免疫測定是以膠體金為標記物,以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定,分為滲濾和層析兩種形式。用于HIV抗體檢體金試紙條屬于金免疫層析,且大多數為間接法及雙抗原夾心法,兩種方法各有優缺點,但都簡單而快速,數分鐘即可得出結論,不需儀器設備,操作人員不需特殊訓練,試劑穩定,適用于單份測定等。