茚三酮顯色反應的影響因素分析概述

　　茚三酮與谷氨酸的顯色反應靈敏度較高 ,但同時也受到多種因素的影響。

　　當實驗條件控制不好時 ,會造成實驗數據的較大偏離 ,從而產生較大的誤差。此顯色反應的影響因素主要有以下幾方面。 

　　1、谷氨酸濃度的影響

　　實驗表明 ,谷氨酸與茚三酮水溶液在表 3所注條件下反應的最低顯色濃度為70μg/ mL 。隨谷氨酸濃度變大 ,顯色逐漸變深。當濃度大于 140μg/ mL 時 ,所顯顏色過深且其光密度值超出量程。當谷氨酸濃度在 80～140μg/ mL時 ,顏色變化明顯且顯色較穩定。

　　2、pH 值的影響

　　以 100μg/ mL 的谷氨酸標準液在不同pH下進行顯色反應。顯色反應隨 pH的不同顏色有明顯的變化。當 pH在 4 以下時不顯色 ,而 pH 在 6～10 時 ,顏色變化明顯。但因茚三酮的水溶液在堿性條件下溶液本身帶有明顯的淡黃色 ,因此 pH選定在 6 左右較好 ,此時基本無顏色干擾且顯色穩定。

　　3、溫度及反應時間的影響

　　實驗表明 ,溫度和反應時間對此顯色反應的影響也很大。以 100μg/ mL 的谷氨酸標準液在 70 ℃進行顯色發應時 ,發現即使加熱30 min 也基本無顏色變化。當溫度為 80 ℃時 ,加熱 30 min 以上有顏色變化 ,而當溫度為 90 ℃時 ,加熱 15 min 左右即有明顯的顏色變化 ,沸水加熱時顏色變化也很明顯。但考慮到蒸發的影響 ,所以實驗選用 90 ℃作為最佳反應溫度。在顯色反應中 ,反應時間主要根據具體的顏色變化而定。一般來說 ,當谷氨酸濃度在 80～140μg/ mL 時 ,90 ℃加熱 20 min 以上即可完全反應。時間太短 ,反應不完全 ,顏色梯度不明顯 , 所以最佳反應時間在 20 ～25 min。