BJS 201910
1 范圍
本標準diyi篇規定了茶葉中鉻酸鉛含量的測定方法。
本標準diyi篇適用于茶葉中鉻酸鉛的測定。
本標準第二篇規定了茶葉中美術綠的定性方法。
本標準第二篇適用于茶葉中美術綠的定性判定。
2術語和定義
下列術語和定義適用于本標準。
2.1 美術綠
美術綠又名鉛鉻綠，用鉻酸鉛顏料沉淀到鐵藍顏料分散體上或使用鉻酸鉛顏料與鐵藍顏料混合均能制備出的一種顏料。美術綠的主要成分為鉻酸鉛和鐵藍，且鉻酸鉛的比例不低于50%。
diyi篇 鉻酸鉛的測定
鉛含量的測定采用現行有效的國家標準GB 5009.12方法，CrO42-的測定選用下述方法。
000011 diyi法 高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜聯用法（HPLC-ICP/MS）
3 原理
茶葉樣品經灰化后，其中的CrO42-經堿性提取液提取后，以液相色譜進行分離，分離后的目標化合物經過霧化由載氣送入ICP炬焰中，經蒸發、解離、原子化、電離等過程，大部分轉化為帶正電荷的正離子，經離子采集系統進入質譜儀，質譜儀根據質荷比進行分離測定。以保留時間和質荷比定性，外標法定量。
4 試劑和材料
除非另有說明，本方法所用試劑均為優級純，水為 GB/T 6682規定的一級水。
4.1 試劑
4.1.1硝酸（HNO3）。
4.1.2氨水（NH3·H2O）。
4.1.3氫氧化鈉（NaOH）：分析純。
4.1.4無水碳酸鈉（Na2CO3）。
4.2 試劑配制
4.2.1堿性提取液（0.1 mol/L NaOH和0.056 mol/L Na2CO3）：稱取4.0 ±0.05 g NaOH（4.1.3）和6.0±0.05g Na2CO3（4.1.4）溶解并定容至1 L，將溶液在20-25 ℃下密封保存于聚乙烯瓶中，使用時pH必須達到11.5以上，有效期1個月。
4.2.2堿性提取液（0.2 mol/L NaOH和0.112 mol/L Na2CO3）：稱取8.0 ±0.05 g NaOH（4.1.3）和12.0±0.05g Na2CO3（4.1.4）溶解并定容至1 L，將溶液在20-25 ℃下密封保存于聚乙烯瓶中，使用時pH必須達到11.5以上，有效期1個月。
4.2.3硝酸溶液（5 mol/L）：取357 mL硝酸（4.1.1）用水定容至1000 mL，混勻待用。溶液在20-25 ℃下避光保存，如溶液呈黃色需重新配制。
4.2.4硝酸溶液（1+9）：取10 mL硝酸（4.1.1）與90 mL水混合，搖勻。
4.2.5氨水溶液（1+9）:取10 mL氨水（4.1.2）與90 mL水混合，搖勻。
4.2.6 硝酸銨溶液（0.05 mmol/L）：一定量水中加入3.4 mL硝酸（4.1.1）和3.7 mL氨水（4.1.2），用水定容至1 L，搖勻；用硝酸溶液(4.2.4)或氨水溶液(4.2.5)調節pH在7.0-7.2范圍內。
4.3 標準品
鉻酸鉛：Lead chromate，CAS號:7758-97-6，分子式PbCrO4，分子量323.18，純度≥99%。
4.4 標準溶液的配制
4.4.1 CrO42-標準儲備液：準確稱取0.0279 g鉻酸鉛標準物質，于100 mL燒杯中，加入50 mL堿性提取液（4.2.2）置于恒溫磁力攪拌水浴鍋中，在90℃-95 ℃溫度下不間斷攪拌30 min，取出后冷卻至室溫后轉移至100 mL容量瓶中，用水沖洗燒杯并轉移至容量瓶中，用水定容至刻度。溶液中CrO42-的濃度為100 mg/L。或使用六價鉻標準溶液進行配制。
4.4.2 CrO42-標準工作液：
取1.0 mLCrO42-標準儲備液（4.4.1）用硝酸銨溶液（4.2.6）定容至10 mL，制得標準中間液，濃度為10 mg/L。
分別吸取0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0 mL標準中間液于100 mL容量瓶中，用硝酸銨溶液（4.2.6）定容并混勻，過水系微孔濾膜（0.45 μm），待上機測定。該標準工作液CrO42-的濃度分別為5 μg/L，10 μg/L，20 μg/L，50 μg/L，100 μg/L，200 μg/L，500 μg/L。該標準工作液現用現配。
5 儀器和設備
注：玻璃器皿及坩堝均需以硝酸溶液（1+4）浸泡2 h，用水反復沖洗，最后用去離子水沖洗干凈。
5.1 高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜聯用儀（HPLC-ICP/MS）。
5.2 分析天平：感量為0.1 mg和0.01 g。
5.3 可調式電阻爐，功率為2000 W。
5.4 磁力攪拌恒溫水浴鍋：能在90 ℃-95 ℃恒溫。
5.5 pH計：精度為0.01。
5.6 樣品粉碎裝置。
6 試樣制備與保存
茶葉樣品去雜后，放入粉碎機中粉碎，樣品全部過標準網篩（425 μm），儲于潔凈容器中，至于陰涼干燥處密封保存，備用。
7 分析步驟
7.1 樣品提取
準確稱取粉碎均勻的茶葉樣品1 g(精確到0.01 g)于100 mL坩堝中，將坩堝置于電爐上以最大功率灼燒至無白煙。冷卻至室溫后加入50 mL堿性提取液(4.2.1)，置于磁力攪拌恒溫水浴鍋中，在90 ℃-95 ℃溫度下不間斷攪拌30 min，取出后冷卻至室溫，定容至100 mL容量瓶中，從中取1.0 mL用硝酸銨溶液（4.2.6）定容至50 mL（或根據實際濃度適當稀釋），過水系微孔濾膜（0.45 μm），待上機測定。按同一操作方法作空白試驗。
7.2 儀器參考條件
7.2.1 液相色譜參考條件
色譜柱：G3268-80001 色譜柱，(柱長30 mm，內徑4.6 mm)，或等效柱。
流動相：0.05 mmol/L的硝酸銨溶液（4.2.6）。
洗脫方式:等度洗脫。
流速：0.6 mL/min。
進樣量：50 μL。
7.2.2 電感耦合等離子體質譜儀參考條件
模式：碰撞反應池模式；RF入射功率為1600 W；載氣為高純氬氣；載氣流速為1.0 L/min；霧化器：漩流霧化器；碰撞反應氣（He），流速為3.5 mL/min；檢測質量數m/z=52(Cr)。
7.3 定量測定
7.3.1 標準曲線的制作
吸取標準系列溶液（4.4.2）50 μL注入液相色譜-電感耦合等離子質譜儀，按儀器參考條件（7.2）進行測定，得到相應的色譜圖，以保留時間定性。以標準系列溶液中目標化合物的濃度為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。
7.3.2 試樣溶液的測定
在相同條件下，吸取空白溶液、試樣溶液（7.1）50 μL注入液相色譜-電感耦合等離子質譜聯用儀進行測定，得到相應色譜圖（參見附錄A），以保留時間定性。根據標準曲線得到待測液中組分的含量，平行測定次數不少于兩次。
8 分析結果表述
8.1試樣中鉻酸根（CrO42-）的含量按式（1）計算：
……………………(1)
式中：
X ——試樣中CrO42-的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
C1 ——樣品溶液中CrO42-的濃度，單位為微克每升（μg/L）；
C0 ——溶劑空白中CrO42-的濃度，單位為微克每升（μg/L）；
V ——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；
?——試樣溶液稀釋倍數；
1000——換算系數；
m ——樣品質量，單位為克（g）。
8.2試樣中鉻酸鉛含量的計算：
當CrO42-含量Pb含量≥0.5597時，試樣測得的Pb含量乘以換算系數1.560，即得鉻酸鉛（以PbCrO4計）的含量；當CrO42-含量/Pb含量＜0.5597時，試樣測得的CrO42-含量乘以換算系數2.787，即得鉻酸鉛（以PbCrO4計）的含量。
計算結果保留三位有效數字。
9 檢測方法的精密度、靈敏度、準確度
9.1 精密度
在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
9.2 靈敏度
當稱樣量為1.0 g，定容體積為100 mL后稀釋50倍測定時，PbCrO4檢出限為10 mg/kg，定量限30 mg/kg。
9.3 準確度
本方法CrO42-添加濃度在30~300 mg/kg范圍內，回收率為87.1%~105.9%。
第二法 離子色譜法（IC法）
10 原理
茶葉樣品經灼燒后，其中的CrO42-經堿性提取液提取，在堿性條件下（pH=9.0±0.5），采用陰離子交換色譜柱分離，離子色譜-電導檢測器測定，外標法定量。
11試劑和材料
除非另有說明，本方法所用試劑均為優級純，水為 GB/T 6682規定的一級水。
11.1 試劑
11.1.1 濃硫酸（H2SO4）。
11.1.2 硝酸（HNO3）。
11.1.3 碳酸氫鈉（NaHCO3）。
11.1.4 氫氧化鈉（NaOH）:分析純。
11.1.5無水碳酸鈉（Na2CO3）。
11.2試劑配制
11.2.1 堿性提取液：配制同4.2.1。
11.2.2 硝酸溶液（5 mol/L）：配制同4.2.3。
11.2.3 淋洗液儲備液（40 mmol/L碳酸鈉和10 mmol/L碳酸氫鈉混合溶液）：分別稱取4.25 g無水碳酸鈉（11.1.5）和0.84 g碳酸氫鈉（11.1.3），用水溶解并定容至1 L，混勻待用。
11.2.4 淋洗液使用液（4 mmol/L碳酸鈉和1 mmol/L碳酸氫鈉混合溶液）：將淋洗液儲備液(11.2.3)用水稀釋10倍，混勻，經水系微孔濾膜（0.45 μm）抽濾后使用。
11.2.5 再生液：吸取2 mL濃硫酸（11.1.1）用水定容至1L，搖勻，經水系微孔濾膜（0.45 μm）抽濾后使用。
11.3 標準品
同4.3。
11.4 標準溶液的配制
11.4.1鉻酸根（CrO42-）標準儲備液：配制同4.4.1。
11.4.2 CrO42-標準工作液：
取濃度為100 mg/L的CrO42-標準儲備液（4.4.1）10 mL用水定容至100 mL，制得標準中間液，濃度為10 mg/L。
分別吸取0.2，0.5，1.0，5.0，10.0，20.0 mL標準中間液于100 mL容量瓶中，用水定容并混勻，過水系微孔濾膜，待上機測定。該標準工作溶液CrO42-的濃度分別為0.02 μg/mL，0.05 μg/mL，0.10 μg/mL，0.50 μg/mL，1.00 μg/mL，2.00 μg/mL。該標準工作液現用現配。
12 儀器和設備
12.1 離子色譜儀，配電導檢測器，碳酸鹽淋洗系統。如采用氫氧根系統，條件見附錄C。
12.2 分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。
12.3 可調式電阻爐，功率為2000 W。
12.4 磁力攪拌恒溫水浴鍋：能在90 ℃-95 ℃恒溫。
12.5 pH計:精度為0.01。
12.6 樣品粉碎裝置。
13 試樣制備與保存
同6。
14 分析步驟
14.1 樣品提取
準確稱取粉碎均勻的茶葉樣品1 g(精確到0.01 g)于100 mL坩堝中，將坩堝置于電爐上以最大功率灼燒至無白煙。冷卻至室溫后加入50 mL堿性提取液(4.2.1)，置于恒溫磁力攪拌水浴鍋中，在90 ℃-95 ℃溫度下不間斷攪拌30 min，取出后冷卻至室溫，轉移至100 mL燒杯中，用硝酸溶液(4.2.3)調pH至9.0±0.5后轉移至500 mL容量瓶中，用水定容并混勻。過水系微孔濾膜(0.45 μm)，待上機測定。按同一操作方法作空白試驗。
14.2 離子色譜條件
色譜柱：Metrosep A Supp 5-150或相當的陰離子色譜柱。
檢測器：電導檢測器。
抑制器：MSM ∥ 化學抑制器。
柱溫：30 ℃。
流速：0.7 mL/min。
進樣量：20 μL。
14.3 定量測定
14.3.1 標準曲線的制作
吸取標準系列溶液（11.4.2）20 μL注入離子色譜儀，按儀器參考條件（14.2）進行測定，得到相應的色譜圖，以保留時間定性。以標準系列溶液中目標化合物的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。
14.3.2 樣品測定
在相同條件下，分別吸取空白溶液、試樣溶液（14.1）20 μL，按儀器參考條件（14.2）進行測定，得到相應色譜圖（參見附錄B），以保留時間定性。根據標準曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數不少于兩次。
15 結果計算
15.1試樣中鉻酸根（CrO42-）的含量按式（2）計算：
……………(2)
式中：
X ——試樣中CrO42-的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
C1 ——樣品溶液中CrO42-的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
C0 ——樣品空白液中CrO42-的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V ——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；
1000——換算系數；
m ——樣品質量，單位為克（g）。
15.2試樣中鉻酸鉛含量的計算：
同8.2。
計算結果保留三位有效數字。
16 方法的精密度、靈敏度、準確度
16.1 精密度
在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
16.2 靈敏度
當稱樣量為1.0 g，定容體積為500 mL時，PbCrO4檢出限為10 mg/kg，定量限30 mg/kg。
16.3 準確度
本方法CrO42-添加濃度在30~300 mg/kg范圍內，回收率為85.17~107.59%。
第二篇 鐵藍定性驗證
17 原理
鐵藍的主要成分亞鐵氰根在酸性條件下蒸餾分解出氰化物，與氯胺T反應，生成氯化氰，與顯色劑生成藍色染料，分光光度法測定。
18 試劑和材料
除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682規定的三級水。
18.1 試劑
18.1.1 氫氧化鈉(NaOH)。
18.1.2 無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。
18.1.3 無水磷酸二氫鉀（KH2PO4）。
18.1.4 氯胺T（C7H7ClNNaO2S·3H2O）。
18.1.5 酒石酸(C4H6O6)。
18.1.6 酚酞（C20H14O4）。
18.1.7 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（C10H10N2O）。
18.1.8 冰乙酸（CH3COOH）。
18.1.9 無水乙醇（CH3CH2OH）。
18.1.10 吡啶（C5H5N）。
18.1.11 甲基橙（C14H14N3SO3Na）。
18.2試劑配制
18.2.1 NaOH溶液（0.1 mol/L）：準確稱取1.0 g NaOH(18.1.1) ，用水定容至250 mL，搖勻待用。
18.2.2 NaOH溶液（0.5 mol/L）：準確稱取5.0 g NaOH(18.1.1) ，用水定容至250 mL，搖勻待用。
18.2.3磷酸鹽緩沖溶液（pH=7.0）：準確稱取42.6 g無水磷酸氫二鈉(18.1.2)和13.6 g無水磷酸二氫鉀(18.1.3)，加水溶解，定容至1L，搖勻待用。
18.2.4氯胺T溶液（10 g/ L）：準確稱取 1.0 g氯胺T(18.1.4)，用水定容至100 mL，搖勻待用，現用現配。
18.2.5酚酞指示液：準確稱取1.0 g酚酞(18.1.6)于60 mL 無水乙醇(18.1.9)中，加水40mL，搖勻待用。
18.2.6吡啶-吡唑啉酮溶液(5 g/L)：準確稱取1.0 g 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(18.1.7)，溶于200 mL無水乙醇(18.1.9)中，加1.2 mL吡啶(18.1.10)，混勻待用，現用現配。
18.2.7乙酸溶液（0.1 mol/ L)：準確吸取1.15 mL冰乙酸(18.1.8)，用水定容至200 mL，搖勻待用。
18.2.8甲基橙指示劑（0.5 g/ L)：準確稱取50 mg甲基橙(18.1.11)，溶于水中，定容至100 mL，搖勻待用。
18.3 標準品
鐵藍：Prussion Blue，CAS號:14038-43-8，分子式Fe4[Fe(CN)6]3，分子量859.23，純度≥99%。
18.4參比溶液配制
準確稱取0.0150 g鐵藍標準物質于250 mL高型燒杯中，準確加入100 mL NaOH溶液（18.2.1），于室溫下震蕩30 min后，取10.0 mL定容至100 mL，取稀釋液1.0 mL于500 mL蒸餾燒瓶中，加水至液體總量約為150 mL，加入1~2滴甲基橙指示劑（18.2.8），再加入2 g酒石酸（18.1.5），溶液由橙黃色變為橙紅色，迅速連接好蒸餾裝置，將冷凝管下端插入盛有10 mL NaOH溶液（18.2.2）的100 mL容量瓶中，收集蒸餾液，調節溫度將蒸餾速度控制在2 mL/min~3mL/min，當蒸餾液接近100 mL時，停止加熱，取下容量瓶，用水定容至刻度，搖勻。此標準溶液中鐵藍的濃度為0.15 mg/L。
19 儀器和設備
19.1 分光光度計：配1 cm比色池。
19.2 分析天平：感量0.01 mg和0.01 g。
19.3 500 mL蒸餾裝置：配冷凝器和聚乙烯毛細管。
19.4 振蕩器。
19.5 離心機。
20分析步驟
20.1試樣制備
準確稱取未經粉碎的茶葉樣品10 g(精確至0.01 g)，準確加入100 mL NaOH溶液（18.2.1）于250 mL 高型燒杯中，于室溫下震蕩30 min后，用漏斗濾去茶葉，濾液于3000 r/min離心5 min，準確移取上清液50 mL于500 mL蒸餾燒瓶中，加水至液體總量約為150 mL，加入1~2滴甲基橙指示劑(18.2.8)，再加入2 g酒石酸（18.1.5），溶液由橙黃色變為橙紅色，迅速連接好蒸餾裝置，將冷凝管下端插入盛有10 mL NaOH溶液（18.2.2）的 100 mL容量瓶中，收集蒸餾液，調節溫度將蒸餾速度控制在2 mL/min~3 mL/min，當蒸餾液接近100 mL時，停止加熱，取下容量瓶，用水定容至刻度，搖勻，待測。同時作空白試驗，空白溶液除不加堿液（18.2.1）和酒石酸（18.1.5）外，均按（20.1）操作。
20.2 測定
準確移取參比溶液（18.4）、樣液（20.1）、空白溶液（20.1）及水（儀器零點校正液）各5.0 mL置于25 mL比色管中，加入1滴酚酞指示液（18.2.5），用乙酸溶液（18.2.7）緩慢調至無色，加4.0 mL磷酸緩沖溶液（18.2.3）和0.3 mL氯胺T溶液（18.2.4），搖勻，靜置3 min，加5.0 mL吡啶-吡唑啉酮溶液（18.2.6），搖勻，靜置20 min，加水至刻度，搖勻。分光光度計于620 nm處，用1 cm比色池，測定吸光度值后比較。
21 定性判定
當扣除空白的樣液吸光度值≥參比溶液的吸光度值時，即鐵藍有檢出，反之，鐵藍未檢出。
22 方法的定量限
當稱樣量為10.0 g，蒸餾燒瓶移取量為50 mL，定容體積為100 mL時，鐵藍的定量限為3 mg/kg。
23 美術綠綜合判定
本方法通過測定茶葉中的鉛和鉻酸根，判定茶葉中是否含有鉻酸鉛。當鉻酸鉛檢出時，需要定性測定茶葉中鐵藍，當鐵藍檢出時，判定茶葉中含有美術綠。茶葉中的美術綠以鉻酸鉛的含量表示，根據8.2計算鉻酸鉛的含量，從而表示茶葉中美術綠的含量。
附
錄
A
HPLC-ICP/MS法的色譜圖
A.1 標準溶液色譜圖（HPLC-ICP/MS法）見圖A.1。
圖A1 HPLC-ICP/MS測得CrO42-標準溶液色譜圖（40 μg/L）
A.2 基質加標色譜圖（HPLC-ICP/MS法）見圖A.2。
圖A.2 HPLC-ICP/MS測得基質加標樣品測定液中的CrO42-色譜圖（20 μg/L）
附 錄 B
離子色譜法的色譜圖
B.1 標準溶液色譜圖（離子色譜法）見圖B.1。
圖B1 離子色譜測得CrO42-標準溶液色譜圖（10 mg/L)
B.2 基質加標色譜圖（離子色譜法）見圖B.2。
圖B2 離子色譜測得基質加標樣品測定液中的CrO42-色譜圖（0.2 mg/L）
本方法負責起草單位：吉林省食品檢驗所
方法的參與驗證單位：大連市食品檢驗所、廣西-東盟食品藥品安全檢驗檢測中心、海南省食品檢驗檢測中心、遼寧省食品檢驗檢測院、北京市食品質量監督檢驗三站。
文章鏈接：儀器設備網 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-704.html