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  • 發布時間:2021-03-01 23:38 原文鏈接: 熒光信號放大TSA優秀替代品—PSA技術(一)

           Power Styramide?信號放大(PSA?)是一種新穎的酶檢測信號放大方法,用于檢測細胞和組織中的低豐度靶標。通過將iFluor?染料的卓越亮度和光穩定性與多HRP介導的PSA?成像相結合,可產生明亮的熒光信號,其準確性和靈敏度明顯高于傳統的免疫組織化學,免疫細胞化學和原位雜交技術。

     

           Power Styramide?信號放大(PSA)

     

           與酪酰胺信號放大(TSA)相似,PSA利用辣根過氧化物酶(HRP)的催化活性原位共價沉積熒光團。 PSA自由基具有比酪胺自由基高得多的反應性,使得PSA系統比傳統的TSA試劑更快,更穩健和靈敏。與酪胺試劑相比,Styramide 綴合物具有以更高效率標記靶標的能力,因此產生顯著更高的熒光信號。PSA?成像技術可以輕松應用于任何檢測過程中需要加入HRP的應用中,例如IHC,ICC,IF,  原位雜交和ELISA。

     

     

           圖1.PSA?檢測方法檢測原理示意圖。使用常規的檢測方法,用未標記的一抗和HRP-二抗綴和物檢測細胞或組織樣品。HRP催化標記的Styramide?轉化為高活性的Styramide?自由基,這些自由基與酶位點上或附近的酪氨酸殘基共價結合。

     

    PSA?成像系統的優勢:

     

           每個HRP標簽的多個Styramide?底物的快速催化和共價沉積所產生的Power Styramide?信號放大轉化成了許多實際優勢,包括簡單,靈敏度和特異性增強以及與其他技術的兼容性。Styramide?基團的較高反應活性,使其在HRP-靶標相互作用位點更牢固,更快速地標記,從而比TSA產生更強的信號和更好的空間分辨率。

     

           PSA?特點及優勢:

     

           超靈敏的低豐度靶標檢測,比IHC,ICC和IF方法高100倍

           高熒光強度,比酪酰胺(TSA)高10至50倍

           與其他熒光標記,染色技術和PSA?成像試劑盒兼容,可進行多重分析

           與放射線檢測相比,PSA?自由基具有更高的反應活性,可提供更快的結果以及同等的靈敏度和分辨率

           保留珍貴的抗體,PSA?標記可減少一抗使用量,也能達到同等水平的靈敏度

           PSA?成像試劑盒易于使用,并提供足夠的試劑用于100次測試

     

    iFluor?594 Styramide? (貨號45035) AlexaFluor?594 tyramide(貨號11082)

     

           優越的檢測靈敏度

     

           將PSA?成像應用于免疫染色實驗中,可以增加一抗稀釋度,而不會使測定靈敏度降低。此外,增加一抗稀釋度會降低非特異性背景信號,并克服固定方法不當或目標表達水平低引起的免疫標記不足。

     

     

           圖3. Power Styramide?信號放大(PSA?)套件的靈敏度。固定,滲透并用不同濃度的兔抗微管蛋白一抗標記HeLa細胞。廠商建議的稀釋度為1:500或2ug / ml。然后,在我們的iFluor?488 PSA?成像試劑盒中用山羊抗兔IgG,AlexaFluor?488標記的酪酰胺或AlexaFluor?488標記的山羊抗兔IgG的試劑對細胞進行染色。在相同條件下(使用FITC濾光片組并在相同的曝光時間下進行分析)從每種處理中捕獲細胞圖像。測量了相對熒光信號強度,并比較了不同檢測方法之間的熒光強度。


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