• <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 發布時間:2021-03-01 23:44 原文鏈接: 熒光信號放大TSA優秀替代品—PSA技術(三)

           靈活的工作流程:與IHC,ICC,ISH和流式細胞儀兼容:

     

           PSA?成像技術可適用于能在其檢測方案中添加HRP的任何應用,并且與免疫學應用中常用的樣品類型和熒光成像平臺兼容。與傳統的IHC,ICC,ISH和FC應用程序結合使用時,PSA?成像可顯著提高檢測靈敏度,而不會降低圖像分辨率或增加背景信號。

     

     

           1. 免疫細胞化學(ICC)

     

           HL-60細胞的CD45表面受體染色。Hl-60細胞用4%甲醛固定,通透并用0.2 μg / mL抗CD45一抗標記。然后將細胞用iFluor?647 Styramide?染色,并使用Cy5濾光片拍攝的熒光圖像。

     

     

           2. 原位雜交(ISH)

     

           使用生物素化的PNA探針通過原位雜交對著絲粒進行染色。使用標準方案將Jurkat細胞固定并透化,用鏈霉親和素HRP綴合物檢測每個染色體的著絲粒,并用iFluor 488苯乙烯酰胺試劑可視化,用DAPI染色細胞核。

     

     

     

     

           3. 流式細胞儀

     

           使用iF488標記的山羊抗兔IgG方法,酪酰胺方法或苯乙烯酰胺方法對Jurkat細胞中的pAKT進行流式細胞分析。苯乙烯酰胺擴增方法的信號強度比山羊抗兔IgG-iFluor?488直接染色高10倍,比Alexa Fluor 488酪酰胺染料染色高5倍。

     

     

           PSA?成像工作流程:

     

           PSA?成像利用辣根過氧化物酶(HRP)的催化活性在原位生成目標蛋白或核酸序列的高密度標記。與IHC,ICC和ISH程序的常規工作流程相似,PSA?成像易于執行,包括幾個簡單的過程。在此工作流程中,將熒光二抗替換為多HRP標記二抗,唯一的附加步驟是與標記的Styramide?一起孵育。

     

           1.固定,透化和封閉細胞或組織樣品。用未標記的一抗,生物素化一抗或生物素化核酸探針孵育樣品。

           2.加入HRP標記二抗或HRP-鏈霉親和素偶聯物。

           3.添加iFluor?染料Styramide?工作溶液,進行HRP催化的Styramide?沉積。

           4.裝入樣品并檢測信號。

     

     

           圖5. Power Styramide?信號放大(PSA?)的工作流程。通過類似于常規ICC和IHC方法的工作流程,PSA?試劑盒和Styramide?試劑可以通過幾個簡單的步驟就可以對所需目標物進行靈敏檢測。

     

         

     


  • <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 调性视频