熒光光度計的兩個單色器是不同的,一個叫做激發單色器,一個叫做發射單色器。在光路中是這樣的,光源燈發出的光進入激發單色器中,然后進入樣品池,激發樣品中的物質發射出熒光,然后在樣品池中呈90°角的方向,發射出的熒光進入發射單色器,然后再進入接收器得到熒光強度。激發單色器是用來激發物質的熒光,在某個波長,被測物質有最大的吸收,和可見分光光度計類似。發射單色器是熒光在某個波長上熒光強度是最大的。一般被測物質的發射波長比激發波長大。