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  • 實驗用具及材料

    相關溶液的配制

    1)20×SSC:175.3g NaCl,88.2g檸檬酸鈉,加水至1000mL(用10mol/L NaOH調pH 至7.0)。

    2)去離子甲酰胺(DF):將10g混合床離子交換樹脂加入100mL甲酰胺中。電磁攪拌30min,用Whatman l號濾紙濾。

    3)體積分數70%甲酰胺/2×SSC:35mL甲酰胺,5mL 20×SSC,10mL水。

    4)體積分數50%甲酰胺/2×SSC:100mL甲酰胺,20mL 20×SSC,80mL水。

    5)體積分數50%硫酸葡聚糖(DS):65oC水浴中融化,4oC或-20oC保存。

    6)雜交液:8μL體積分數25%DS,20μL 20×SSC混合。(或40μL體積分數50%DS,20μL 20×SSC,40μL ddH2O混合)取上述混合液50μL,與5μL DF混合即成。其終濃度為體積分數10%DS,2×SSC,體積分數50%DF。

    7)PI/antifade溶液

    PI原液:先以雙蒸水配置溶液,濃度為100μg/mL,取出1mL,加39mL雙蒸水,使終濃度為2.5μg/mL。Antifade原液:以PBS緩沖液配制該溶液,使其濃度為10mg/mL,用0.5mmol/L的NaHCO3調pH值為8.0。取上述溶液1mL,加9mL甘油,混勻。

    PI/antifade溶液:PI與antifade原液按體積比1:9比例充分混勻,-20oC保存備用。

    8)DAPI/antifade溶液:用去離子水配制1mL/mg DAPI儲存液,按體積比1:300,以antifade溶液稀釋成工作液。

    9)封閉液I:體積分數5%BSA 3mL,20×SSC 1mL,ddH2O 1mL,Tween20 5μL混合。

    10)封閉液II:體積分數5% BSA 3mL,20×SSC 1mL,goat serum 250μL,ddH2O 750μL,Tween20 5μL混合。

    11)熒光檢測試劑稀釋液:體積分數5% BSA 1mL,20×SSC 1mL,ddH2O 3mL,Tween20 5μL混合。

    12)洗脫液:100mL 20×SSC,加水至500mL,加Tween20 500μL。


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