您可以選擇熒光染料SYBGREEN體系，具體請參照說明書。
您可靈活使用20-50ul間其他體積，注意保證終濃度相同。
A2010A0106試劑盒:
反應體系終濃度(自配熱啟動熒光系統)：
1-2U的hotstartTaq酶、3-5.5mM的Mg2+
、0.2mM的dNTPs、1×PCRbuffer（A2010A0106）；50－900nM的上游引物（可先設200nM）、
50－900nM的下游引物（可先設200nM）、200nM的探針、通常取2-5ul的模板,無菌去離子水補足，反應總體積通常為 20－50ul
自配熱啟動熒光－UNG體系：
1-2U的Taq酶、1×PCRbuffer、
2.5-4.0mM的Mg2+（A2010A0105）；0.2-1U的UNG酶(A2010A0107)（可先設為
0.5U）、0.2mM的d(A,C,G)TPs、0.2-0.4mMdUTP（要調整）(A2010A0108)；50－900nM的上游引物（可先設200nM）、50－900nM的下游引物（可先設200nM）、200nM的探針、通常取2-5ul的模板、反應總體積通常為20－50ul。
3、反應體系和條件的優化:
使用高產量，特異和靈活的定量PCR試劑體系FQ PCR MASTER Mix-UDG（hot start），優化參數最少。您只需要優化退火溫度，就可以得到更靈敏、更可靠的定量結果。對于特殊結構的熒光PCR，您可以優化引物濃度，來得到更特異或更靈敏的結果。
使用通用PCR Master Mix 試劑盒進行反應體系的配制，可以適合更多的反應體系，如mRNA的普通RT-PCR檢測，適用于合成質粒的PCR，同時也適用于熒光PCR，范圍更寬。
采用成套的hot start Taq酶 kit(A2010A0106)，該試劑盒中含有進行熱啟動熒光核心試劑盒的所有成分，也降低了選擇純度不夠或不合適產品的風險。您需要根據以下原則進行優化：
1、您需要對酶量和鎂離子濃度進行優化。酶的推薦反應濃度為1.25－1.5 U（50ul），必要時可在1-2U之間探討酶的最佳條件；Mg離子推薦濃度普通PCR終濃度為1－3 mM, 熒光PCR終濃度為3－5.5 mM，請在該范圍內探討最佳條件。
2、試劑盒中提供的dNTP已經預混，能夠充分保證產品質量和PCR的忠實性。dNTP選擇經典的0.2mM的濃度即可。
3、另外，上游引物和下游引物濃度可先設為200 nM。當結果不理想時，可以在50nM－900nM之間進行探討。
4、 如選用Taqman探針，探針濃度可設為200 nM，不須探討。選擇其他種類的探針需根據要求設置探針濃度。
5、可以先用推薦的反應條件，如果結果不佳，可根據引物、探針設計的具體情況適合的退火溫度，退火時間和循環數。
6、DNA模板的添加量通常在100
ng以下，因不同種類的DNA模板中含有的靶基因的拷貝數不同，必要時可進行梯度稀釋，確定最佳的DNA模板添加量。如果欲進行2 Step
RT-PCR反應的第二步PCR擴增反應，第一步的RT反應液作為DNA模板時的添加量不要超過PCR反應液總體積的10%。
7、稀釋所有探針、引物或配制模板請使用無菌雙蒸水或Tris溶液。所有反應容器應保證無菌無酶無熱源。如進行RNA反應應采用無RNA降解酶的水和容器進行操作。
如采用hot start
Taq酶來配制與A2010A0101相同的熱啟動熒光體系（含UNG/dUTP防污染體系），您可以選擇A2010A0105，A2010A0107和
A2010A0108進行。與A2010A0106不同的是除了以上的優化步驟外，還增加了對UNG/dUTP系統進行探討。建議先使用
A2010A0106優化好產品體系后，再來優化該防污染系統。
0.2-1U的UNG酶(A2010A0107)（可先設為0.5U）、 0.2mM的d(A,C,G)TPs、0.2-0.4mMdUTP
(A2010A0108)。反應條件如酶量、Mg離子等都已經調好（參照A2010A0106）,您可以固定d(A,C,G)TPs的濃度為0.2mM，并設定UNG濃度為0.5U(50ul)，dUTP濃度也設為0.2mM，初步來看反應結果。如結果不理想可調整dUTP濃度（上調）。直至得到滿意結果。并可進行防污染能力測試（用含U的擴增片斷進行）。
請參照3：影響PCR及熒光PCR 的其他因素進行優化。總之，優化的指標越多，實驗的不確定性就越大。避免在操作中引入更大的不確定性和不可重復性。可參照的QPCR MASTER Mix-UDG（hot start）使用注意事項。
4、適用的熒光儀器、實驗設計、熒光曲線和數據分析；
目前市場上有許多種實時PCR儀：其中包括ABI7700，ABI7900，ABI7000 (Applied Biosystems)；MX4000
(Stratagene)；iCycler (Bio-Rad)；Smartcycler(Cepheid)；Robocycler (MJ
Research)；Lightcycler (Roche)；ROTORGENE(CORBERT) ；杭州博日（Linegene）。
不同的儀器使用方法有所區別，但都具備對Taqman 探針和sybgreen 染料法的檢測波長和檢測能力。QPCR MASTER Mix-UDG（hot start）和通用PCR Master Mix均適合在這些儀器上進行使用。
為確保實驗數據的有效性，每次實驗都設陰性對照和4個標準品，每個樣品都平行做2個復孔。
基線或閥值的設定 通常是以10－15個循環的熒光值作為閥值，也可以以陰性對照熒光值的最高點作為基線