(1)引物設計不夠優化:應避免引物二聚體和發夾結構的出現。
(2)模板有基因組的污染:RNA提取過程中避免基因組DNA的引入,或通過引物設計避免非特異擴增。
(3)實驗器材污染:移液器、水、槍頭或者熒光定量PCR孔內有熒光污染。