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  • 發布時間:2023-02-28 10:20 原文鏈接: 熒光定量PCR陰性對照曲線上揚為什么

    熒光定量PCR 陰性對照曲線上揚為什么
    溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線,顧名思義,其跟模板(或其濃度)沒有關系,擴增什么基因就應該有其相對應的溶解曲線,類似于電泳。那么你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰(一般SYBR法的目的基因在80~90℃之間),我說的是一般情況,這個跟擴增片段長短有關系。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體(一般為60~75℃之間)視引物長度而定,而基因組DNA污染的峰會在90℃以后。出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因(也有可能是從加完反應液到上機開始PCR這之間的時間過長)所致;基因組DNA那么考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gDNA的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板污染,注意實驗操作等避免模板污染

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