本法系將藥物溶液的顏色與規定的標準比色液比較,或在規定的波長處測定其吸光度。品種項下規定的“無色”系指供試品溶液的顏色相同于水或所用溶劑,“幾乎無色”系指供試品溶液的顏色不深于相應色調0.5號標準比色液。
1.目視比色法
除另有規定外,取各品種項下規定量的供試品,加水溶解,置25ml納氏比色管中,加水稀釋至10ml,另取規定色調和色號的標準比色液10ml,置于另一25ml納氏比色管中,兩管同置白色背景上,自上向下透視,或同置白色背景前平視觀察,供試品管呈現的顏色與對照管的顏色比較,不得更深。如供試管呈現的顏色與對照管的顏色深淺非常接近或色調不完全一致,使目視觀察無法辨別兩者的深淺時,應改用第三法(色差計法)測定,并將其測定結果作為判定依據。
藥典規定用重鉻酸鉀液(每1ml含0.800mg的K2Cr2O7)為黃色原液,硫酸銅液(每1ml含62.4mg的CuSO4·5H2O)為藍色原液,氯化鈷液(每1ml中含59.5mg CoCl12·6H2O)為紅色原液。
分別取不同比例的以上三種比色液與水,配成深黃色、黃綠色、黃色橙黃色、橙紅色和棕紅色六種色調的標準貯備液。并按規定量取各種色調標準儲備液,加水稀釋至10ml,即得黃綠色、黃色、橙黃色、橙紅色和紅色的1~10號的標準比色液。
檢查時根據藥物有色雜質的顏色以及對其限量要求,選擇相應顏色一定色號的標準比色液作為對照液,進行比較。如注射用對氨基水楊酸鈉溶液顏色的檢查方法:取供試品一瓶,加水溶解制成每1ml含0.2g的溶液,與黃色6號標準比色液比較,不得更深。
2.分光光度法
用分光光度法檢查有色雜質,通過測定溶液的吸收度而更能反映溶液的顏色變化。除另有規定外,取各供試品項下規定量的供試品,加水溶解并使成10ml,必要時濾過,濾液照紫外-可見分光光度法于規定波長處測定,吸光度不得超過規定值。
如維生素C易受外界條件影響而變色,規定取本品3.0g,加水15ml,振搖使溶解,溶液經4號垂熔玻璃漏斗濾過,濾液于420nm波長處測定吸收度,不得過0.03。
3.色差計法
本法是通過色差計直接測定溶液的色差值,對其顏色進行定量表述和分析的方法。當目視比色法較難判定供試品與標準比色液之間的差異時,應考慮采用本法進行測定與判斷。
供試品與標準比色液之間的顏色差異,可以通過分別比較供試品與水之間的色差值來得到,也可以通過直接比較它們之間的色差值來得到。
測定時除另有規定外,用水對儀器進行校準。取按各品種項下規定的方法制得的供試品溶液和標準比色液,置儀器上進行測定,供試品溶液與水的色差值△E*應不超過相應色調的標準比色液與水的色差值△E0*。
也可以將預先測定好的各色調色號的標準比色液對水的標準色差值△E0*輸入到儀器,然后直接測量供試品溶液對水的色差值△E*;若△E*值小于等于△E0*,供試品溶液顏色合格,反之為不合格。