實驗方法原理
紅景天苷不僅具有抗衰老、抗抑郁、抗癌、抗缺氧、保護肝臟、改善心腦血管功能和提高中樞神經系統功能等多種藥理作用，還可以起到抗疲勞、抗缺氧、抗腫瘤、抗病毒和增強免疫功能的藥理作用。巨噬細胞是機體免疫系統的重要遞呈細胞，在特異性和非特異性免疫過程中均發揮著重要的作用。
實驗材料 小鼠
試劑、試劑盒 Sal刀豆蛋白A 四甲基偶氮鹽唑L-谷氨酰胺β-二巰基乙醇放線菌酮青霉素鏈霉素RPM Ⅱ1640培養基胎牛血清羧基熒光素雙醋酸鹽琥珀酰亞胺酯2-7-二氯氫化熒光素乙二脂G riess試劑盒
儀器、耗材 酶標儀流式細胞儀熒光酶標儀
實驗步驟
一、材料準備
1. 小鼠腹腔巨噬細胞懸液的制備
（1）將BALB/c小鼠眼球放血處死，用750 mL/L 乙醇消毒小鼠皮膚后。
（2）腹腔注射5 mL RPMI1640基礎培養基。
（3）輕揉小鼠腹部5 min，從側腹壁小心抽吸出液體，收集細胞到15 mL 的離心管中，于4℃以1500 r/min，離心5 min，棄上清，用RPMI1640基礎培養基重懸，并將細胞密度調整為2×109個細胞/L，接種到96/24孔細胞培養板中，于37℃、50 mL/L CO2培養箱培養。
（4）3 h 后棄上層培養液，用冷的RPMI1640基礎培養基輕輕洗滌2次，去除未貼壁細胞即得已貼壁的巨噬細胞。
二、實驗步驟
1. 對照實驗
（1）實驗設置空白對照組（加DMEM完全培養液）、對照組（加巨噬細胞懸液）、Sal80 μmol/L 組、Sal160 μmol/L 組和Sal320 μmol/L 組，每組設3個復孔。
（2）將取密度為2×109個細胞/L的腹腔巨噬細胞接種于96孔板中，每孔添加190 μL的RPMI1640基礎培養基，并加入10 μL的Sal工作液，使其終濃度分別為80 μmol/L、160 μmol/L 及320 μmol/L，于37℃、50 mL/L CO2培養箱中培養48 h。
（3）每孔加入20 μL （質量濃度為5mg/L）MTT，避光孵育4 h 后，離心（1500 r/min，5 min）棄上清，每孔加100 μL 二甲基亞砜（DMSO），于振蕩器上避光振蕩10 min 以溶解孔底紫色結晶，在酶標儀于490 nm 波長檢測各孔吸光度值，并計算細胞的相對存活率。
（4）細胞相對存活率=[（不同濃度的Sal組的A值-空白對照組的A值）/（對照組的A值-空白對照組的A值）]×100%。
2. 采用MTT比色法檢測
（1）實驗設對照組、LPS+IFN-γ組和Sal+LPS+IFN-γ組，每組設3個復孔。
（2）將密度為2×109個細胞/L的腹腔巨噬細胞接種到96孔板中，每孔添加190 μL的RPMI1640基礎培養基，并加入10 μL不同濃度的Sal（終濃度為80、160、320 μmol/L）培養4 h。
（3）加入LPS9（終濃度為10 mg/L）和IFN-γ（終濃度為80 μg/L），于37℃、50 mL/L CO2培養箱中培養48 h。
（4）每孔加入20 μL的MTT（終濃度為5mg/L），繼續培養4 h后離心（1500 r/min，5 min）。
（5）棄上清，每孔加入100 μL DMSO，震蕩10 min，酶標儀于波長490 nm檢測A值，并計算Sal對巨噬細胞的增殖促進率。
（6）促進率=[（Sal+LPS+IFN-γ組的A值—LPS+IFN-γ組的A值）/LPS+IFN-γ組的A值]×100%。
3. 采用SytoxGreen染色法檢測
（1）實驗設對照組、CHX和Sal+CHX組，每組設3個復孔。
（2）將密度為2×109個細胞/L的腹腔巨噬細胞接種到96孔板中，添加190 μL RPMI1640基礎培養基，將10 μL終濃度為160 μmol/L的Sal工作液加入到貼壁的巨噬細胞中。
（3）培養4 h 后，在CHX組加入終濃度為0.5 μmol/L 的CHX，繼續于37℃、50 mL/L CO2孵箱中培養48 h。
（4）加入終濃度為0.5 μmol/L的Sytox??Green對96孔板中的巨噬細胞室溫下染色15 min，用熒光酶標儀檢測巨噬細胞Sytox Green染色的熒光強度。