一、性狀
鹽酸普魯卡因、鹽酸丁卡因和苯佐卡因的性狀描述見表1。
二、鑒別
(一)化學法
1.芳香第一胺類的鑒別反應 鹽酸普魯卡因、苯佐卡因分子結構中具有芳伯氨基,可發生重氮化-偶合反應,即在酸性溶液中與亞硝酸鈉發生重氮化反應,生成重氮鹽,再與堿性β-萘酚偶合產生橙黃到猩紅色偶氮化合物。方法為:取供試品50mg,加稀鹽酸1ml,必要時緩緩煮沸,使溶解,放冷,加0.1mol/L亞硝酸鈉溶液數滴,再加堿性β-萘酚試液數滴,生成橙黃到猩紅色沉淀。
2.水解產物反應 鹽酸普魯卡因、苯佐卡因分子結構中具有酯鍵,容易水解。利用水解產物的性質可進行鑒別。
鹽酸普魯卡因鑒別方法:取本品約0.1g,加水2ml溶解后,加10%氫氧化鈉溶液1ml,即生成白色沉淀;加熱,變為油狀物;繼續加熱,發生的蒸氣能使濕潤的紅色石蕊試紙變為藍色;熱至油狀物消失后,放冷,加鹽酸酸化,即析出白色沉淀。
苯佐卡因與強堿液共沸,發生水解反應,生成乙醇及對氨基苯甲酸鹽。乙醇遇碘試第八章典型藥物及其制劑的質量檢測液并受熱發生碘仿反應,即生成黃色沉淀,并有碘仿的臭氣。藥典采用此方法鑒別苯佐卡因。
3.測定衍生物的熔點 鹽酸丁卡因含有叔胺氮原子,可與硫氰酸銨生成沉淀,其熔點約為131℃。方法為:取本品約0.1g,加5%醋酸鈉溶液10ml溶解后,加25%硫氰酸銨溶液1ml,即析出白色結晶;濾過,結晶用水洗滌,在80℃干燥,依法測定。
(二)光譜法
藥典采用紅外分光光度法鑒別鹽酸普魯卡因、鹽酸丁卡因及苯佐卡因原料藥,要求待測藥物的紅外吸收光譜應與對照圖譜一致。
三、檢查
主要討論特殊雜質的檢查。鹽酸普魯卡因分子結構中有酯鍵,其水溶液易發生水解反應。鹽酸普魯卡因注射液在制備過程中受滅菌溫度、時間、溶液pH值、貯藏時間以及光線和金屬離子等因素的影響,可發生水解反應,生成對氨基苯甲酸和2-二乙氨基乙醇。其中對氨基苯甲酸隨貯藏時間的延長或高溫加熱,可脫羧、氧化為有色物,使注射液變黃,不僅療效下降,而且毒性增加。故藥典采用HPLC法的外標法檢查鹽酸普魯卡因及其注射液中的雜質對氨基苯甲酸。
鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查方法:取本品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.2mg的溶液,作為供試品溶液另取對氨基苯甲酸對照品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含1μg的溶液作為對照品溶液;取供試品溶液lml與對照品溶液9ml混合均勻,作為系統適用性試驗溶液。照高效液相色譜法試驗,用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH至3.0)-甲醇(68:32)為流動相;檢測波長為279nm取系統適用性試驗溶液10μl,注入液相色譜儀,理論板數按對氨基苯甲酸峰計算不低于2000,鹽酸普魯卡因峰和對氨基苯甲酸峰的分離度應大于2.0。取對照品溶液10μl,注入液相色譜儀,調節檢測靈敏度,使主成分峰高約為滿量程的20%。精密量取供試品溶液與對照品溶液各10μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有與對氨基苯甲酸峰保留時間一致的色譜峰,按外標法以峰面積計算,不得過0.5%
四、含量測定
(一)亞硝酸鈉滴定法
鹽酸普魯卡因、苯佐卡因具有芳伯氨基,在鹽酸存在下能與亞硝酸鈉定量地發生重氮化反應,生成重氮鹽。因此,藥典采用亞硝酸鈉滴定法測定鹽酸普魯卡因、注射用鹽酸普魯卡因、苯佐卡因的含量。
鹽酸普魯卡因的含量測定方法:取本品約0.6g,精密稱定,照永停滴定法,在15～25℃,用亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當于7.28mg的C13H20N2O2。
(二)非水溶液酸堿滴定法
藥典采用乙醇作為溶劑的非水溶液酸堿滴定法,定鹽酸丁卡因的含量。方法為:取本品約0.25g,精密稱定,加乙醇50ml振搖使溶解,加0.01mol/L鹽酸溶液5ml,搖勻,照電位滴定法,用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定,兩個突躍點體積的差作為滴定體積。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當于30.08mg的C15H24N2O2·HCl。
(三)紫外分光光度法
本類藥物中含有共軛體系,具有紫外吸收,可用于含量測定。藥典采用紫外分光光度法測定注射用鹽酸丁卡因的含量。方法為:取本品10瓶,分別加水溶解,并分別定量轉移至250ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;另取鹽酸丁卡因對照品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含2mg的溶液,作為對照品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各3ml,分別置于100ml量瓶中,加鹽酸溶液(1→200)5ml與磷酸鹽緩沖液(pH6.0)(取磷酸氫二鉀20g與磷酸二氫鉀80g,加水溶解并稀釋至1000ml,6mol/L的氫氧化鉀溶液調節pH至6.0)10ml,用水稀釋至刻度,搖勻,照紫外-可見分光光度法,在310nm的波長處分別測定吸光度,計算每瓶的含量,求出平均含量,即得。每瓶中鹽酸丁卡因的含量按式計算:
式中,As為供試品溶液的吸光度;Ar為對照品溶液的吸光度;Cr為對照品溶液的濃度;V為定容體積(250ml);D為供試品溶液稀釋倍數(D=1);Vs為供試液10瓶的體積(ml)。
(四)高效液相色譜法
藥典采用HPLC法測定鹽酸普魯卡因注射液的含量。方法如下。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH至3.0)-甲醇(68:32)為流動相;檢測波長為290nm,理論板數按鹽酸普魯卡因峰計算不低于2000。鹽酸普魯卡因峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。
測定法 精密量取本品適量,用水定量稀釋制成每1ml中含鹽酸普魯卡因0.02mg的溶液,作為供試品溶液,精密量取10μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖;另取鹽酸普魯卡因對照品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含鹽酸普魯卡因0.02mg的溶液,同法測定。按外標法以峰面積計算,即得。