一、性狀
對乙酰氨基酚、鹽酸利多卡因、鹽酸布比卡因的性狀描述見表1。
二、鑒別
(一)化學法
1.芳香第一反應 對乙酰氨基酚結構中共有在的芳氨基,可在酸性條件下加熱水解,水解產物可發生重氮化一偶合反應。
鑒別方法:取本品約0.1g,加稀鹽酸5ml,置水浴中加熱40分鐘,放冷;取0.5ml,滴加亞硝酸鈉試液5滴,搖勻,用水3ml稀釋后,加堿性β一萘酚試液2m1,振搖,即顯紅色。
藥典收載的對乙酰氨基酚及其片劑、嚼片、泡騰片、注射液、栓劑、膠囊劑、顆粒劑與滴劑均采用此法鑒別。鹽酸利多卡因,鹽酸布比卡因結構中雖然也有潛在的芳伯氨基,但因鄰位的2個甲基的空間位阻效應,使其不易水解,故不能用此法鑒別。
2.三氯化鐵反應 對乙酰氨基酚結構中具有酚羥基,可與三氯化鐵試液反應顯藍紫色。
鑒別方法:取本品的水溶液,加三氯化鐵試液即顯藍紫色。
3.重金屬離子反應 鹽酸利多卡因酸氨基上的氮可在碳酸鈉試液中與銅離子配位,生成藍紫色的配位化合物,溶于三氯甲烷后則呈黃色。
鑒別方法:取本品0.2g,加水20ml溶解后,取溶液2ml,加硫酸銅試液0.2ml與碳酸鈉試液1ml,即顯藍紫色;加三氯甲烷2ml,振搖后放置,三氯甲烷層黃色。
4.氯化物的鑒別 鹽酸利多卡因和鹽酸布比卡因均為鹽酸鹽,顯氯化物的鑒別反應。
(二)光譜法
1.紫外-可見分光光度法 本類藥物中均有苯環,具有紫外吸收。藥典收載的鹽酸布比卡因采用此法鑒別。方法為:取本品,精密稱定,按干燥品計算,加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.40mg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,在263nm與271nm的波長處有最大吸收;吸光度分別為0.53～0.58與0.43~0.48。
2.紅外分光光度法 藥典收載的對乙酰氨基酚、鹽酸利多卡因、鹽酸布比卡因、醋氨苯砜均采用此法鑒別,其紅外光吸收圖譜應與對照圖譜一致。
三、檢查
(一)對乙酰氨基酚中特殊雜質檢查
由于對乙酰氨基酚的生產工藝路線較多,不同的生產工藝路線所帶入的雜質也有不同,除可能引入一般雜質外,還可能引入中間體、副產物及分解產物等特殊雜質,如對氨基酚、對氯苯乙酰胺、鄰乙酰基對乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亞胺等。藥典采用HPLC法檢查對氨基酚及有關物質和對氯苯乙酰胺。
1.對氨基酚及有關物質檢查方法臨用新制。取本品適量,精密稱定,加溶劑[甲醇-水(4:6)]制成每1ml中約含20mg的溶液,作為供試品溶液;另取對氨基酚對照品和對乙酰氨基酚對照品適量,精密稱定,加上述溶劑溶解并制成每1ml中約含對氨基酚1μg和對乙酰氨基酚20μg的混合溶液,作為對照品溶液。照藥典附錄VD高效液相色譜法試驗。用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉8.95g,磷酸二氫鈉3.9g,加水溶解至1000ml,加10%四丁基氫氧化銨溶液12ml)-甲醇(90:10)為流動相;檢測波長為245nm;柱溫為40℃;理論板數按對乙酰氨基酚峰計算不低于2000,對氨基酚峰與對乙酰氨基酚峰的分離度應符合要求。取對照品溶液20μl,注人液相色譜儀,調節檢測靈敏度,使對氨基酚色譜峰的峰高約為滿量程的10%,再精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍;供試品溶液的色譜圖中如有與對照品溶液中對氨基酚保留時間一致的色譜峰,按外標法以峰面積計算,含對氨基酚不得過0.005%;其他雜質峰面積均不得大于對照品溶液中對乙酰氨基酚的峰面積(0.1%)雜質總量不得過0.5%。
雜質對氨基酚的限量按式計算,其他各雜質的雜質限量按式計算,雜質總量按照面積歸一化法計算。其中
2.對氯苯乙酰胺檢查方法 臨用新制。取對氨基酚及有關物質項下的供試品溶液(即取本品適量精密稱定,加溶劑[甲醇一水(4:6)]制成得每1ml中約含20mg的溶液)作為供試品溶液;另取對氯苯乙酰胺對照品和對乙酰氨基酚對照品適量,精密稱定,加溶劑[甲醇一水(4:6)]溶解并制成每1ml中約含對氯苯乙酰胺1μg與對乙酰氨基酚20μg的混合溶液,作為對照品溶液照高效液相色譜法試驗。用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉8.95g,磷酸二氫鈉3.9g,加水溶解至1000ml,加10%四丁基氫氧化銨12ml)-甲醇(60:40)為流動相;檢測波長為245nm;柱溫為40℃;理論板數按對乙酰氨基酚峰計算不低于2000,對氯苯乙酰胺峰與對乙酰氨基酚峰的分離度應符合要求。取對照品溶液20μl,注入液相色譜儀,調節檢測靈敏度,使對氯苯乙酰胺色譜峰的峰高約為滿量程的10%,精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖;按外標法以峰面積計算,含對氯苯乙酰胺不得過0.005%。
(二)制劑檢查
對乙酰氨基酚片、膠囊、顆粒劑需檢查溶出度,對乙酰氨基酚片采用溶出度測定法(第一法),膠囊劑、顆粒劑采用溶出度測定法(第二法),以紫外-可見分光光度法測定溶出量。
對乙酰氨基酚膠囊的溶出度測定方法:取本品,照溶出度測定法(第二法)以稀鹽酸24ml加水至1000ml為溶出介質,轉速為每分鐘50轉,依法操作,經45分鐘時,取溶液濾過,精密量取續濾液1ml,置50ml量瓶中,0.04%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,照紫外-可見分光光度法,在257nm的波長處測定吸光度,按C8H9NO2的吸收系數(
)為715計算每粒的溶出量。限度為標示量的80%,應符合規定。
每粒的溶出量按式計算
式中,A為供試品溶液的吸光度;D為供試品溶液的稀釋倍數,50/1=50;V介質為溶出介質的體積,1000ml;L為吸收池的光路長度;
為吸收系數715。
四、含量測定
(一)非水滴定法
鹽酸利多卡因的脂烴胺側鏈中為叔胺氮,鹽酸布比卡因側鏈含哌啶環,均具有弱堿性,可采用非水滴定法測定含量。藥典收載的鹽酸布比卡因采用此方法測定含量。
(二)紫外一可見分光光度法
對乙酰氮基酚結構中含有苯環,其0.4%氫氧化鈉溶液于257nm波長處有最大吸收,可用于原料及其制劑的含量測定。藥典采用吸收系數法,測定對乙酰氨基酚原料、片劑、咀嚼片、栓劑、膠囊劑及顆粒劑的含量。
1.對乙酰氨基酚的含量測定
取本品約40mg,精密稱定,置250ml量瓶中,加0.4%氫氧化鈉溶液50ml溶解后,加水至刻度,搖勻,精密量取5ml置100ml量瓶中,加0.4%氫氧化鈉溶液10ml,加水至刻度,搖勻,依照分光光度法,在257nm波長處測定吸收度,按C8H9NO2的吸收系數(
)為715計算,得。按干燥品計算,含C8H9NO2應為98.0%-102.0%。
對乙酰氨基酚的含量按式計算
式中,A為供試品溶液的吸光度;D為供試品溶液的稀釋倍數,100/5=20;V為定容體積,250ml;
為吸收系數,715;L為吸收池的光路長度;m為供試品的稱樣量。
2.對乙酰氨基酚片的含量測定 取本品10片,精密稱定,研細,精密稱取適量(約相當于對乙酰氨基酚40mg),置250ml量瓶中,加0.4%氫氧化鈉溶液50ml與水50ml,振搖15分鐘,加水至刻度,搖勻,濾過,精密量取續濾液5ml,置100ml量瓶中,加0.4%氫氧化鈉溶液10ml,加水至刻度,搖勻,照紫外-可見分光光度法,在257nm的波長處測定吸光度,按C8H9NO2的吸收系數(
)為715計算,即得。本品含對乙酰氨基酚(C8H9NO2)應為標示量的95.0%～105.0%。
對乙酰氨基酚片標示量的百分含量按式計算
式中,A為供試品溶液的吸光度;D為供試品溶液的稀釋倍數,100/5=20;V為定容體積,250ml;
為吸收系數715;L為吸收池的光路長度;ms為供試品稱樣量;為平均片重。
(三)高效液相色譜法
藥典收載的對乙酰氨基酚的泡片、注射液滴劑、凝膠、鹽酸利多卡因的原料注射液、膠漿以及鹽配布比卡因注射液的含量采用此法測定含量。