實驗方法原理 小鼠的足底光滑裸露,無毛,適于熱刺激致痛模型。若將小鼠置于溫度55℃±0.5℃的金屬熱板上,則其“舔后足”現象可以作為出現疼痛反應的指標。通過考察疼痛反應的出現時間(痛閾),可以反映鎮痛藥的療效。然而,熱板法致痛模型主要用于篩選麻醉性鎮痛藥,并不適用于篩選解熱鎮痛藥,后者可使用化學性致痛模型進行評價。
嗎啡為中樞鎮痛藥,屬于阿片類藥物,主要作用于μ阿片受體。水楊酸鈉為外周解熱鎮痛藥,其鎮痛作用與抗炎作用密切相關。本實驗通過熱刺激致痛模型,比較了嗎啡及水楊酸鈉鎮痛作用機制的差異。
實驗材料 小鼠(昆明種)雌雄各半
儀器、耗材 鹽酸嗎啡溶液4%鹽酸水楊酸鈉(乙酰水楊酸)溶液苦味酸生理鹽水電熱板注射器天平
實驗步驟
1. 篩選小鼠 將小鼠置于溫度55℃±0.5℃的金屬熱板上,測定其疼痛反應(“舔后足”現象)的出現時間,共測定2次,每次間隔5min。若出現疼痛反應的時間在10s至30s之間,則視為合格。共篩選出9只小鼠。
2. 分組 先將小鼠逐一稱重,再按照體重由小到大(或由大到小)排序。按照簡化隨機原則分為3組(甲、乙、丙),每組3只。
3. 小鼠腹腔注射給藥(15ml/kg) 甲組為0.1%鹽酸嗎啡溶液,乙組為4%鹽酸水楊酸鈉(乙酰水楊酸)溶液,丙組為生理鹽水。記錄給藥時間。
4. 觀察 給藥15,30,45,60min后分別使用熱板法測定疼痛反應出現時間(痛閾),若置于熱板上60s內仍未出現疼痛反應,則均視為60s。
5. 計算痛閾提高百分率
注意事項
1. 小鼠性別選擇:由于雄性小鼠陰囊下垂,陰囊皮膚可接觸熱板,并對疼痛較為敏感,可能影響實驗結果,故本實驗中選擇雌性小鼠。
2. 若小鼠在熱板上60s內仍未出現疼痛反應,亦要將其從熱板上移開,以免燙傷。
3. 熱板法為評價藥物鎮痛作用的常用方法,其優點在于裝置簡便、對小鼠損傷小、且實驗動物可反復利用。除熱刺激致痛模型外,鎮痛藥的其他篩選模型亦包括:機械刺激、電刺激、化學刺激等方法。熱刺激、機械刺激及電刺激致痛模型均適用于篩選麻醉性鎮痛藥,而化學刺激致痛模型(扭體法)適用于篩選解熱鎮痛藥。