萊克多巴胺和瘦肉精的前處理及檢測

方案優勢

簡單,快速,準確。

采用標準

國家相關標準

方法/原理/步驟

　　豬肉豬肝中萊克多巴胺和瘦肉精的前處理

　　1.萃取

　　5g勻漿樣品加25ml乙腈和25ml 0.1mol/l的鹽酸溶液,(加入內標);漩渦10min,離心后取上清液30ml,待過柱。

　　2.SPE凈化

　　a.活化：用5mL甲醇和5mL水分別預淋洗柱管；

　　b.上樣：將處理好的樣品載入SPE柱管；流速控制在1ml每分鐘;

　　b.淋洗：分別加入3mL水和5 mL甲醇進行淋洗，并將柱床通空氣抽干;

　　d.洗脫:用5mL%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。

　　3.衍生化

　　將上述2.d中的洗脫液氮氣吹干; 70℃烘箱烘20min;加入100ul的BSTFA衍生化試劑,渦旋混勻; 70℃烘箱加熱90min(如果用99%的BSTFA,時間為40min);冷卻至室溫后,氮氣吹干;加入200ul甲苯,進GCMS。

　　實驗步驟：

　　1.酸化乙醇的制備：60%的乙醇(v/v)，100ml，加入0.5ml濃鹽酸

　　2.標準溶液的制備：稱取適量鹽酸克侖特羅，用甲醇稀釋成10ppm的標準溶液

　　3.樣品的提取及其衍生化

　　取約10mg(準確至0.001g)經勻漿后的豬瘦肉于150mL錐形瓶中，加30mL酸化乙醇，用玻璃棒攪散肉團，于振蕩器上振搖提取15min，全部轉入離心管中，以3000r/min離心15min，合并上清液，用2mol/LNaOH液(約2mL)調pH>12，將其導入100mL具塞量筒內，用正己烷(5mLx3)提取，合并正己烷提取液于50mL燒杯中，70℃水浴揮去正己烷至1mL左右，將殘留液轉入具塞濃縮瓶中，燒杯用0.5mL正己烷洗滌，洗液并入濃縮瓶中，用N2氣吹干溶劑，向殘渣中加入0.05mL BSTFA，塞上瓶塞，放入75±5℃的烘箱中，衍生90min，取出濃縮瓶，冷至室溫后，用N2氣吹去BSTFA，殘渣用0.05mL甲苯溶解，密塞待測。

　　4.標準溶液的衍生化：

　　將1.0ug的克侖特羅標準液放于10比色管中，加入1mL酸化乙醇混勻，加入2mol/L NaOH液,pH>12后，用2mL正點己烷提取，吸出正己烷，溶液再用2mL正己烷提取，合并正己烷提取液，加入100ul乙酸乙酯或乙腈，再加入100ul BSTFA，密閉，80℃加熱90min，冷卻到室溫，吹干，加入100或50ul甲苯，溶解待測。

　　5.分析條件：

　　100℃(1min)，20℃/min，270℃(10min)

　　監測離子：86，187，243，262.277

　　6萊克多巴胺: 179,250,267,502

儀器設備

　　試劑:

　　1.BSTFA衍生化試劑(N-O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺)與三甲基氯硅烷的混合液(99:1);2.色譜級乙醇,濃鹽酸(分析純);乙酸乙酯(色譜級);甲醇(色譜級);氫氧化鈉(分析醇);甲苯(色譜級)

　　其它:

　　分析天平(0.0001g),10ml容量瓶(5個), 50ml容量瓶(5個),電子移液槍(500ul, 100ul),錐型瓶(150ml,5個);勻漿機(1臺),玻璃棒,振蕩器(1臺),離心機(5000r/min), PH試紙,分液漏斗(250ml),鐵架臺,燒杯(100ml, 50ml),氮吹儀,濃縮瓶,恒溫水浴鍋,烘箱。