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  • 發布時間:2019-04-08 15:01 原文鏈接: 菌種保藏實驗_核酸的保存

    實驗步驟

    1. 以溶液形式置低溫保存

    DNA 溶于無菌 TE 緩沖液(10 mmol/L Tris ? HCl,1 mmol/L EDTA,pH 8.0)中,其中 EDTA 的作用是整合溶液中二價金屬離子,從而抑制 DNA 酶的活性(Mg2+ 是 DNA 酶的激活劑)。 TE 的 pH 為 8.0 是為了減少 DNA 的脫氨反應。哺乳動物細胞 DNA 的長期保存。可在 DNA 樣品中加入 1 滴氯仿,避免細菌和核酸酶的污染。RNA 一般溶于無菌 0.3 mol/L 醋酸鈉(pH 5.2)或無菌雙蒸餾水中,也可在 RNA 溶液中加 1 滴 0.3 mol / L VRC(氧釩核糖核苷復合物),其作用是抑制 RNase 的降解。核酸分子溶于合適的溶液后可置 4℃ 、-20℃ 或 -70℃ 條件下存放。4 ℃ 條件下樣品可保存 6 個月左右, -70℃ 條件下則可存放 5 年以上。


    2. 以沉淀的形式置低溫保存

    乙醇是核酸分子有效的沉淀劑。將提純的 DNA 或 RNA 樣品加入乙醇使之沉淀,離心后去上清液,再加入乙醇,置 4℃、- 20℃ 可存放數年,而且還可以在常溫狀態下郵寄。


    3. 以干燥的形式保存

    將核酸溶液按一定的量分裝于 Eppendorf 管中置低溫(鹽冰,干冰、低溫冰箱均可)預凍,然后在低溫狀態下真空干燥,置 4℃ 可存放數年以上。取用時只需加入適量的無菌雙蒸餾水,待 DNA 或 RNA 溶解后便可使用。

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