蔓荊子提取物的有效成分研究及其含量測定

蔓荊子為常用中藥材，中國藥典收載蔓荊子商品為馬鞭草科植物單葉蔓荊Vitex trifolia L.var.simplicifolia Cham.或三葉蔓荊V.trifolia L.的干燥成熟果實。單葉蔓荊分布廣，產量大，在我國主要分布在山東、江西一帶。蔓荊子作為中藥，具有疏散風熱、清利頭目的功效[1]。目前，許多植物提取廠家都在生產蔓荊子提取物，但他們都是以牡荊素(Vitexin)為有效成分指標在生產，產品也是以牡荊素為指標在向客戶銷售，我們經過對蔓荊子提取物的研究發現，真正起主要作用的是蔓荊子黃素，根本就沒有牡荊素的成分。我們對蔓荊子提取物進行了分離和測定，并從中分離出來了蔓荊子黃素，并對其進行含量測定，結果很好，對蔓荊子提取物的生產控制有可靠依據。

一、蔓荊子黃素的分離

1、儀器、試劑與提取物

1、1 儀器 X4型顯微熔點測定儀，溫度計未校正。HITACHI-200型紫外光譜儀。Shimadzu-400型紅外光譜儀。FX-90Q AM-300核磁共振儀，HP 5989A色-質聯用儀。

1、2 試劑 層析用硅膠為青島海洋化工產品，Sephodex LH-20凝膠樹脂，石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇均為分析純

1、3 提取物 蔓荊子提取物為自己生產產品

2、蔓荊子提取物的分離鑒定

Me OH

max

取蔓荊子提取物1kg，用95%乙醇溶解，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成稠膏，拌入硅膠，干燥后上硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，分別收集，根據薄層點板定性檢查，取蔓荊子黃素部分，再上凝膠樹脂，用氯仿-甲醇(1：1)洗脫，結晶分離，得兩個化合物，一個為黃色細針狀結晶，一個為黃色結晶。

黃色結晶，mp189~190℃，鹽酸-鎂粉反應陽性，UVλ mn;256，273(sh)，372;加三氯化鋁-鹽酸263，280(sh)，371;加醋酸鈉257，275，350(10min后不減弱);加醋酸鈉-硼酸255，270，352。MSm/z;374(M+，100)，359，355，331，316，301，285，273，257，245，217，187，173，164，151，135，135，121，93，69，53，43。1HNMRδppm：

3.73，3.80，3.87，3.92(s，OCH3×4)，6.87(1H，s，8-H)，7.1(1H，d，J=9.2H z，5’-H)，7.5(1H，dd，J=9.2，3.0Hz，6’-H)，7.6(1H，d，J=3.0Hz，2’-H)，根據以上化學性質及光譜數據，鑒定為蔓荊子黃素。

黃色細針狀結晶，mp242~243℃(含水甲醇重結晶，文獻值236~238℃)，鹽酸-

MeOH

max

鎂粉反應陽性，UVλ nm;260，273(sh)，351;加甲醇鈉270，404;加三氯化鋁276，295(sh),405;加三氯化鋁-鹽酸268，280(sh)，296(sh)，372，400(sh);加醋酸鈉265，402(10min后不減弱)，加醋酸鈉-硼酸264，376。MS m/z;360(M+，100)，345，341，319，302，299，274，259，245，231，217，203，181，166，153，137，121，109，97，81，69，55，43。1HNMRδppm：3.37，3.80，3.92(s，OCH3×3)，6.68(1H，s，8-H)，6.92(1H，d，J=8.5H z，5’-H)，7.49(1H，dd，J=8.5，2.0Hz，6’-H)，7.6(1H，d，J=2.0Hz，2’-H)，9.36，9.79，12.64(s)各一羥基上活潑氫，重水交換后消失。根據以上化學性質及光譜數據，鑒定為3，6，7-三甲基槲皮萬壽菊素[2] 。

二、蔓荊子黃素的含量測定

2、儀器與試劑

2、1儀器 美國熱電TSP高效液相色譜儀，7725i自動進樣器，AG135十萬分子一電子天平

2、2 試劑 甲醇、磷酸均為分析純，水為雙重蒸餾水，對照品蔓荊子黃素自制，經HPLC分析，純度為99.58%，蔓荊子提取物自己生產。

3、含量測定

3、1 色譜條件：色譜柱C18柱，流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液(60：40)，檢測波長258NM，流速1.0ml/min，柱溫：30℃

3、2 標準曲線的制備：精密稱取干燥至恒重的蔓荊子黃素對照品1.5mg，置于10ml容量瓶中，甲醇溶解定容，作為對照品溶液。精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，照上述條件測定，以蔓荊子黃素的峰面積積分值為縱坐標，其濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：C=2.225×10-7A-4.72×10-4，r=0.9999，其線性范圍在0.015mg/ml—0.075mg/ml。

3、3 樣品的測定：精密稱取蔓荊子提取物25mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解，超聲振蕩，定容過濾，取續濾液，即為供試品溶液。照上述方法測定，計算含量即得。

3、4 回收率實驗：精密稱取已知含量的蔓荊子提取物25mg，加入蔓荊子黃素對照品0.75mg，按照樣品測定項下進行處理，測定，計算回收率：98.18%，RSD=1.46%。

3、5 精密度試驗：在上述條件下，對同一濃度的對照品溶液連續6次進樣，計算峰面積平均值，RSD為0.945%。

3、6 重現性試驗 按照樣品測定方法，對同一批號樣品進行5次平行試驗，蔓荊子黃素含量RSD為1.72%。

三、小結

從我們對蔓荊子提取物的分離鑒定部分說明，在蔓荊子提取物中根本就沒有牡荊素成分，而只有與之功效幾乎相同的蔓荊子黃素，同時，我們對蔓荊子提取物進行高效液相分析，也沒有牡荊素的成分峰出現，所以現市場上走的蔓荊子提取物應以蔓荊子黃素為指標，在生產過程中也應以蔓荊子黃素為有效成分來控制蔓荊子提取物的生產，這為以后的蔓荊子生產提供了依據。

四、參考文獻

[1] 吳永忠，朱良輝等，不同產地蔓荊子化學成分含量比較，中藥材，23(10)，2000，616~619

[2] 王坤等，蔓荊子的薄層鑒定，山東中醫雜志，18(2)，1999，82~83