薄層掃描法測定薄層掃描法中延胡索乙素的含量

胃得康片是佛山馮了性藥業有限公司生產的中藥成方制劑，由延胡索、佛手、雞骨香、白及、枯礬、石菖蒲6味藥組成，具有行氣止痛的功效，用于氣滯胃痛、胃及十二指腸潰瘍療效較好。為更好地控制該產品的質量，作者采用薄層掃描法對其處方中的君藥延胡索中所含主要成分延胡索乙素進行含量測定。實驗結果表明，該方法操作簡便，結果可靠，能有效控制產品的內在質量。

    1 儀器與試藥
    島津CS-930雙波長薄層掃描儀。延胡索乙素由中國藥品生物制品檢定所提供，批號726-9004。胃得康片由佛山馮了性藥業有限公司生產。試劑均為分析純。

    2 方法與結果
    2．1 對照品溶液的配制 取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。
    2．2 供試品溶液的配制 取本品30片，研細，取約5g，精密稱定，置錐形瓶中，加乙醚40mL、濃氨溶液2mL，混勻，放置24h后超聲處理15min，濾過；藥渣用乙醚洗滌3次，每次10mL，合并濾液及洗液，用10％醋酸溶液振搖提取4次(15，10，10，10 mL)，酸液用濃氨溶液調節pH值至10～11，再用氯仿振搖提取3次，每次15mL，合并氯仿提取液，水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解并定容至1mL，作為供試品溶液。
    2．3 薄層色譜條件薄層板：用1％氫氧化鈉加0.3％羧甲基纖維素鈉溶液制備。展開劑正己烷-氯仿-甲醇(7.5：4：1)。顯色劑稀碘化鉍鉀試液。
    2．4 薄層掃描條件單波長反射法鋸齒色譜掃描，狹縫0.4mm×0.4mm，線性化參數Sx=3，靈敏度中等，測定波長510nm。
    2．5 標準曲線及線性范圍 用定量毛細管精密吸取延胡索乙素對照品溶液2，3，4，5，6μL，分別點于同一塊薄層板上，按擬定的色譜和掃描條件，測定各斑點面積的積分值，以點樣量為橫坐標(X)，斑點峰吸收面積積分值為縱坐標(Y)，得一不通過原點的直線。回歸方程為：Y=29770+17850X，r=0.9993線性范圍為2.12～6.36μg。
    2．6 精密度實驗同板精密度試驗：在同一塊薄層板上，重復點供試品溶液5μL 5個點，展開，顯色，掃描，測定，結果RSD=2.7％(n=5)。異板精密度試驗：取同一批號供試品溶液5μL，點樣于5塊薄層板上，展開，顯色，測定，結果RSD=2.9％(n=5)。
    2.7 穩定性實驗 取供試品溶液和對照品溶液，點樣、展開、顯色，每30min至1h測定1次樣品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算含量，連續測定6h。結果表明6h之內，樣品含量基本不變(RSD=2.4％，n=8)。
    2.8 重復性實驗 精密稱取同一批號的樣品約5g，共5份，按上述方法提取并制備成供試品溶液，取上述供試品溶液5μL、對照品溶液2，4μL，分別在5塊薄層板上點樣，展開，顯色，分別測定樣品含量，結果RSD=2.9％(n=5)。
    2．9 加樣回收試驗 取已測得含量的樣品，精密稱取約5g，各5份，分別加入延胡索乙素對照品溶液(濃度為1.065 g/L)各0.5mL，精密量取，揮干溶劑，按供試品溶液制備方法提取，將供試品溶液5μL 、延胡索乙素對照品溶液2，6μL，交叉點于同一用1％氫氧化鈉與0.3％羧甲基纖維素鈉制備的硅膠G薄層板上，按擬定的色譜和掃描條件，分別測定各斑點面積積分值，計算出延胡索乙素的含量，減去已知樣品中延胡索乙素的量，計算加樣回收率，平均回收率為101.5％，RSD=1.9％(n=5)。
    2．10 樣品含量測定 取3批樣品按供試品溶液制備方法操作。精密吸取樣品溶液5μL、對照品溶液2，4μL，分別交叉點于同一薄層板上，以正己烷-氯仿-甲醇(7.5：4：1)為展開劑，展開，取出，晾干，顯色，掃描，測得3批樣品中延胡索乙素的含量。

  3 討論
    3.1 提取方法的選擇參考文獻n刮，根據胃得康片的處方工藝和片劑的特點，擬定了提取胃得康片延胡索中延胡索乙素的不同提取方法。
    根據實驗結果顯示，用乙醚、氨水浸泡24h后，超聲提取，用10％醋酸提取，提取液堿化后用氯仿萃取，蒸干，用甲醇定容的方法。此批樣品所用的延胡索藥材含延胡索乙素為0.51mg/g，每片含延胡索藥材為0.072g，故所選用的方法提取較完全。
    3．2 由于用稀碘化鉍鉀作顯色劑，顯色劑中含有大量的水分，薄層板顯色后，樣品斑點非常不穩定，而且延胡索乙素濃度稍高，顯色斑點在顯色幾分種后就會出現斑點中心變白，而且白斑不再顯色，故采用斑點顯色后在烘箱(100℃)烘3min，待水分消失后，顯色穩定。