偶氮苯和蘇丹Ⅲ由于極性不同，利用薄層色譜(TLC)可以將二者分離。
(1)點樣。
取兩塊制好的薄層板，分別在距一端1 cm處用鉛筆輕輕畫一條橫線作為起始線。取管口平整的毛細管插入樣品溶液[6]中，在一塊板的起點上點1%偶氮苯的甲苯溶液和混合液兩個樣點。在第二塊板的起點線上點1% 蘇丹Ⅲ 的甲苯溶液和混合液兩個樣點，樣點間相距1~1.5 cm。如果樣點的顏色較淺，可重復點樣。重復點樣前，必須待前次樣點干燥后進行。樣點直徑不應超過2 mm。
(2)展開。
用6：1(體積比)的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，待樣點干燥后，小心放入已加入展開劑的廣口瓶中進行展開。瓶的內壁貼一張環繞周長約4/5的濾紙，下面浸入展開劑中，以使容器內被展開劑蒸氣飽和。點樣一端應浸入展開劑0.5 cm。蓋好瓶塞，觀察展開劑前沿上升至離板的上端1 cm處取出，盡快用鉛筆在展開劑上升的前沿處畫一記號，晾干后觀察分離的情況，比較二者 Rf 值的大小。