三氯乙酸沉淀法
| 實驗方法原理 | |
|---|---|
| 實驗材料 | 樣品 |
| 試劑、試劑盒 | 預冷三氯乙酸 乙醇 乙醚 |
| 儀器、耗材 | Whatman GF-C玻璃纖維膜 多功能真空儀（Fisher) 20 ml 閃爍瓶 閃爍計數器 |
| 實驗步驟 |
1. 加入 20 μl 預冷的 10% TCA 停止反應，充分混勻，冰浴 10 min 以沉淀蛋白質。 2. 將樣品點在真空儀中的 Whatman GF-C 玻璃纖維膜上，待樣品通過膜后用 500 μl 預冷的 5% TCA 洗樣品管，并將洗后的液體也點在膜上。 3. 用 5 ml 5% 的預冷 TCA 溶液洗膜 4 次，用 10 ml 95% 的乙醇洗一次，再用 10 ml 乙醚洗 3 次，使膜干燥。 4. 將干燥后的膜放入 20 ml 閃爍瓶，在閃爍計數器中用契侖科夫（Cerenkov）射線計數。
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| 注意事項 |
1. 乙醚是易燃品，因此帶乙醚操作時必須在通風櫥中進行，并遠離火源和熱源。乙醚洗液應被妥善處理。 2. 如果需對每分鐘蛻變次數（dpm）定量，將干燥后的膜放入10 ml 的閃爍液中計數。 3. 膜用 95% 乙醇清洗后可直接用于 Cerenkov 射線計數。假如用此膜進行閃爍計數，乙醚的清洗很重要，因為TCA（可被乙醚洗掉）在閃爍液中可導致強的化學發光，使計數失去意義。
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