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  • 發布時間:2019-03-28 22:31 原文鏈接: 蛋白共沉淀檢測實驗_備擇用GST融合蛋白

    實驗材料

    全細胞抽提物

    試劑、試劑盒

    谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿抗體免疫共沉淀緩沖液氯化鈉蛋白 A G-瓊脂糖漿2 × 樣品緩沖液(用于 SDS-PAGE 膠)

    儀器、耗材

    20 ml 注射器和 18-G 針頭漢密爾頓注射器

    實驗步驟


    1. 按照蛋白 A/G-瓊脂糖漿所述的方式準備兩份樣本(見「用蛋白A/G-瓊脂糖」步驟 1),不加抗體。


    2. 4℃ 下最大速度離心 10 min,沉淀非特異性聚集。轉移上清到新的離心管中。


    3. 加 30 μl 谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿(25~30 μl 珠子體積)。確保在加到樣本中之前瓊脂糖漿均勻懸浮。


    4. 旋轉樣本,沉淀然后洗谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿,并且進行SDS- PAGE電泳和免疫印跡分析(見「用蛋白A/G-瓊脂糖」步驟 5~10)。

    展開


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