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  • 發布時間:2020-04-21 19:12 原文鏈接: 蛋白染色液說明書

    儲存條件

    常溫貯存,開封后一年有效。如4℃貯存,會有結晶形成,37℃溫浴融化后可繼續使用。

    ● 產品簡介

    FastBlue蛋白染色液是以考馬斯亮藍G-250為主要成分,采用新配方配置而成。可用于SDS-PAGE或非變性PAGE膠(native gel)的快速染色。

    特點:方便快捷-不用漂洗,不用加熱,不用脫色,不用固定,條帶2分鐘可見。

    靈敏度高-檢測下限10ng蛋白

    兼容性好-適用于變性和非變性膠以及質譜分析

    綠色環保-不含甲醇,冰醋酸

    ● 用前必讀:

    1 使用前如發現瓶中有少許沉淀,請混勻后使用。

    2以下“使用方法”是針對0.75mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

    ● 使用方法:

    1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,用適量蒸餾水漂洗一下。

    2. 棄蒸餾水,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),搖床上常溫搖動,根據下表確定染色時間。

    待檢測蛋白量

    染色時間

    >1 μg

    2分鐘

    100ng-1μg

    10分鐘

    10ng-100ng

    60分鐘

    3. 觀察記錄結果。

    ● 附:質譜處理程序

    1. 切下待檢蛋白條帶置于1.5ml離心管中。

    2. 加入1ml 30%乙醇或30%丙酮(也可用30%醋酸,但會導致蛋白N端酰基化)。

    3. 處理30分鐘。 

    4. 重復步驟2,3直到去除所有染料。一般處理2-3次既能完全去除染料。 

    5. 質譜分析。

    ● 注意事項:

    1. 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請加入更多的染色液并延長染色的時間。

    2. 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無必要。

    3. 本染色液可以重復利用1-2次,敏感性會有輕微下降,請延長染色時間。

    4. 本染色液有輕微腐蝕性,請帶手套操作。使用后,請蓋好瓶蓋,常溫密封保存。

    ● 問題解答:

    Q1 FastBlue染膠的最佳溫度是多少?

    A1 為達到最佳的染色效果,推薦常溫(20-25℃)染色。

    Q2 FastBlue溶液需要低溫貯存嗎?

    A2 Fastblue不需要低溫貯存,常溫貯存(20-25℃)即可。4-8℃貯存,FastBlue會有結晶生產,37℃溫浴融化后可繼續使用。

    Q3 FastBlue的染色原理是什么?

    A3 FastBlue染色原理與經典考馬斯亮藍G250染色原理相同(與蛋白質中堿性氨基酸結合),優點是更加快速和更高的靈敏度。

    Q4 FastBlue染色后,凝膠可以用蒸餾水保存嗎?

    A4 可以,蒸餾水保存最為簡單,也可以保存在稀釋的冰醋酸中。

    Q5 FastBlue染色后的凝膠能做質譜分析嗎?

    A5 可以。請參閱“質譜處理程序”

    Q6 FastBlue染色的凝膠能做Weatern Blot嗎?

    A6 不可以。蛋白的染色是不可逆的,染色的凝膠不能用作下游的轉膜操作。

    Q7 Fastblue能重復使用嗎?

    A7 FastBlue可以重復使用2-3次,但靈敏度有所下降,可以通過延長染色時間來彌補。

    Q8 為什么凝膠過夜染色后條帶出現涂抹狀拖尾?

    A8 FastBlue過夜染色不會對凝膠過度染色。出現抹涂狀拖尾原因是上樣量太大,因為FastBlue染色靈敏度較高。另外,分子量較小的蛋白在過夜染色中會有擴散現象,我們推薦染色最好在60分鐘內完成。

    Q9 FastBlue有固定凝膠的作用嗎?

    A9 FastBlue是水系溶液,沒有固定凝膠的作用。然而,由于染色會在60分鐘內完成,染色前無需對凝膠進行固定。


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