1、制作標準曲線
（1 ）從－20℃取出1mg/ml BSA，室溫融化后，備用。
（2） 取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。
（3 ）按下表在各管中加入各種試劑。
0μg | 2.5μg | 5.0μg | 10.0μg | 20.0μg | 40.0μg | |
1mg/ml BSA | － | 2.5μl | 5.0μl | 10.0μl | 20.0μl | 40.0μl |
0.15mol/L NaCl | 100μl | 97.5μl | 95.0μl | 90.0μl | 80.0μl | 60.0μl |
G250考馬斯亮藍溶液 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |
（4）混勻后，室溫放置2min。在生物分光光度計（Bio－Photometer，Eppentoff）上比色分析。
2、檢測樣品蛋白含量
（1）取足量的1.5ml離心管，每管加入4℃儲存的考馬斯亮藍溶液1ml。室溫放置30min后即可用于測蛋白。
（2 ）取一管考馬斯亮藍加0.15mol/L NaCl溶液100ul，混勻放置2分鐘可做為空白樣品，將空白倒入比色杯中在做好標準曲線的程序下按blank測空白樣品。
（3 ）棄空白樣品，用無水乙醇清洗比色杯2次（每次0.5mL），再用無菌水洗一次。
（4） 取一管考馬斯亮藍加95ul 0.15mol/L NaCl溶液和5ul待測蛋白樣品，混勻后靜置2min，倒入扣干的比色杯中按sample鍵測樣品。
注意：每測一個樣品都要將比色杯用無水乙醇洗2次，無菌水洗一次。可同時混合好多個樣品再一起測，這樣對測定大量的蛋白樣品可節省很多時間。測得的結果是5ul樣品含的蛋白量。