問題 | 原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
膠不平 | 玻璃板不干凈 | 膠板洗刷干凈； |
催化劑或加速劑的量不合適 | 加入過硫酸銨和TEMED的量要合適； | |
試劑未混均，致使部分膠塊聚合不均勻 | 加入試劑后搖勻，使其充分混合； | |
受熱不均勻導致膠聚合不均勻 | 溫度合適 | |
凝膠漏液 | 玻璃板未對齊 | 兩塊玻璃板底部要對齊 |
條帶比正常的窄 | 凝膠聚合不均勻 | 灌膠時候盡量混合均勻，動作輕緩； |
加樣孔扭曲 | 拔梳子要迅速，清洗加樣孔要小心，以免把上樣帶扭曲 | |
“微笑”條帶 | 樣品鹽濃度過高會擠壓其他條帶導致寬窄不一 | 純化樣品，調整鹽濃度 |
“倒微笑”條帶 | 膠板底部有氣泡會影響電泳效果 | 應趕走膠板底部氣泡，同時注意電泳槽裝置是否合適 |
凝膠腫脹或卷曲 | 取出凝膠后暴露空氣中過久 | 可將凝膠在轉膜之前放到轉膜緩沖液中浸泡5~10min |
條帶歪斜或漂移 | 電轉儀長期使用導致海綿變薄，“三明治”結構不緊湊導致 | 可在兩塊海綿之間墊上少許普通的草紙 |
單個或多個白點 | 膜與膠塊之間有氣泡 | 確保膜和膠塊之間沒有氣泡 |
轉膜緩沖液過熱 | 緩沖液中離子濃度太低，電流或電壓太高 | 轉膜過程注意降溫 |
背景過高 | 膜沒有均勻浸濕 | 轉膜前用100%甲醇將膜完全浸濕 |
膜或者緩沖液污染 | 拿取膜與吸水紙時要戴手套 | |
封閉不充分 | 更換新鮮轉膜緩沖液 | |
抗體與封閉劑出現交叉反應 | 檢測一抗、二抗與封閉劑是否有交叉反應 | |
抗體濃度過高 | 雜交前檢測一抗、二抗的工作濃度 | |
封閉時間與清洗時間過長 | 減少封閉或清洗時間 | |
上樣量過大 | 合適的上樣量 | |
壓片時間過長 | 縮短壓片時間 |