本法系依據蛋白質分子中含有的兩個以上肽鍵在堿性溶液中與Cu2+形成紫紅色絡合物，在一定范圍內其顏色深淺與蛋白質濃度呈正比，以蛋白質對照品溶液作標準曲線，采用比色法測定供試品中蛋白質的含量。
本法快速、靈敏度低，測定范圍通常可達1～10mg。本法干擾測定的物質主要有硫酸銨、三羥甲基氨基甲烷緩沖液和某些氨基酸等。
試劑
雙縮脲試液
取硫酸銅1.5g、酒石酸鉀鈉6.0g和碘化鉀5.0g，加水500ml使溶解，邊攪拌邊加入10%氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻，即得。
對照品溶液的制備
除另有規定外，取血清白蛋白（牛）對照品或蛋白質含量測定國家標準品，加水溶解并制成每1ml中含10mg的溶液。
供試品溶液的制備
照各品種項下規定的方法制備（蛋白質濃度應與對照品溶液基本一致）。
測定法 精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml（對照品溶液取用量可在本法測定范圍內進行適當調整），分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加入雙縮脲試液4.0ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在540nm的波長處測定吸光度；同時以0號管作為空白。以對照品溶液濃度與其相對應的吸光度計算線性回歸方程。另精密量取供試品溶液適量，同法操作。從線性回歸方程計算供試品溶液中的蛋白質濃度，并乘以稀釋倍數，即得。