實驗方法原理
實驗材料 載體（如 CDM 8）
實驗步驟
1. 將目的基因亞克隆至合適的載體中得到所需的重組 DNA 。用小量法（5 ml 培養液）或用 CsCl／溴化乙錠離心法純化重組 DNA。
2. 在轉染的前一天，將 COS-7 細胞以約 20% 匯片的數量種入含 DMEM-2 CS 培養基的 100 mm 培養皿（這樣在第二天細胞可長至約 50% 匯片）。讓細胞生長過夜至約50% 匯片。
3. 使用前（對每一個待轉染的 100 mm 培養皿中的 COS 細胞），將 5 ml 37℃ 的 DMEM-2 NS 培養液與 0.2 ml DEAE-葡聚糖/氯喹溶液徹底混勻，再加入 5~10 重組 DNA 混勻。
4. 吸出 COS 細胞的培養液，向每一個 100 mm 培養皿加入步驟 3 制備的 DMEM-2 CS／DEAE-葡聚糖／DNA。溫育細胞 3~4 h。用差相顯微鏡觀察細胞。
DEAE-葡聚糖將引起細胞收縮并變得空泡化。長時間的孵育可提高轉染效率，而另一方面也會使細胞死亡。
5. 吸出 DMEM／DEAE-葡聚糖／DNA，加入 5 ml 10% DMSO (用 PBS 配制）。室溫溫育細胞 2 min。
6. 吸出 DMSO 并加入 10 ml DMEM-2 CS。讓細胞生長過夜（12~20 h）。如果過夜培養后有大量細胞浮起，則需重新開始，但在第二步時細胞應多長一天。
7. 將每個 100 mm 培養皿中轉染的 COS 細胞傳代至兩個新的 100 mm 培養皿。
轉染后，COS 細胞生長不好，第二天傳代有助于恢復生長，提高蛋白質表達水平。此外，DEAE-葡聚糖處理后的細胞變黏，第二天傳代可恢復細胞貼壁的特點，這樣用 PBS 和 EDTA 輕柔處理后，細胞可能會再次浮起。
8.1 當表達分泌蛋白時，
在完成步驟 7 后 96 h，加入 5 ml DMEM-2 CS 并培養 4 天。收獲培養液，室溫下以約 1000 g 離心 10 min，除去死細胞和碎片，保留上清液。用生物學鑒定或代謝標記和免疫沉淀、免疫親和層析、放射免疫或免疫印跡來檢測分泌蛋白。
8.2 當表達細胞表面蛋白或細胞內蛋白時，
按步驟 6 轉染后 72 h，從細胞中吸出培養液。加入 5 ml PBS，搖晃洗滌，吸出 PBS。加入 5 ml 溶于 PBS 中的 0.5 mmol/L EDTA，溫育 15 min。用巴斯德吸管輕輕移出培養皿中的細胞。采用合適的熒光抗體使細胞表面蛋白染色，通過顯微鏡或流式細胞儀檢測。
注意事項
除非特別說明，所有的細胞均需在 37℃、6% CO2 加濕培養箱中培養。