| 實驗步驟 | 堿性銅還原分析法 (Lowry 法）（Lowryetal.，1951) 和其他能夠增強檢測性能的方法都是基于一個包括兩個步驟的過程。首先，雙縮脲反應涉及蛋白質在堿性溶液環境中將銅還原（由Cu2+到 Cu+); 隨后是反應增強的階段,Folin-Ciocalteu 試劑 (憐鉬酸鹽和憐鎢酸鹽)(PeterSon,1979) 被還原后產生一種在 750nm 處有最大吸光度的藍色物質。這種檢測方法因蛋白質序列的不同而有所變化，因為顏色的產生不僅取決于還原的銅-酰胺類復合物，而且還與酪氨酸、色氨酸有關，在較小的程度上還與胱氨酸、半胱氨酸、組氨酸殘基等有關 (Peterson,1977;Wuetal.，1978)。
Lowry 法已經被改良以減少其對干擾物的敏感性、增加動態范圍、縮短檢測時間以及產生穩定的顏色生成物 (Peterson,1979)。有許多商業來源的改良 Lowry 法 (Roche、Pierce、Bio-Rad 和 Sigma)，但不同的制劑可能不會得到相同的結果數據，即便是使用相同的標準品、稀釋緩沖液或存在相同的干擾物質。
1.向 1 mL 含量為 5~100pg/mL 的一系列蛋白質標準品及該濃度范圍內的待測樣品中分別加入 ImL 堿性銅試劑，混勻, 室溫放置 10 min。
2.加人 0~5 mL Folin-Ciocalteu 試劑混合物，禍旋使之充分混勻，孵育 30 min。
3.孵育完成后再次渦旋混勻，檢測 750mn 處的吸光度。
吸光度的讀取范圍可以從 650~750nm, 這取決于可用的合適的濾光器 (酶標儀），或者，如果信號太強，不會對檢測性能產生顯著的影響。Lowry 法不是端點檢測（endp0intassay)，所以樣品檢測應該交錯進行以獲得更精確的測量值。
4.在有限的標準品濃度范圍內觀察到的反應將是線性的。可用多項式、指數和對數模型擬合數據以擴大反應曲線的動態范圍。
上述的 Lowry 法可適應于微孔板，以減少所加人反應物的體積，產生的動態為 50~500 ug/mL。由于靈敏度、線性及方法學上的進步，Lowry 法已基本被 BCA 法所取代。
Lowry 法對許多干擾性化合物敏感 (表 8.1)，對于這些物質可能不會產生線性反應 (因而導致要推斷復雜的干擾數據）。去污劑、脂類、鉀離子和磷酸鈉的存在會導致沉淀產生。
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