要點：為了避免凝膠或膜的蛋白質污染，進行以下操作時需戴手套。
1.凝膠電泳之后，立即將凝膠轉移到一個塑料容器中。 凝膠在電印跡之前不能進行染色，因為接觸甲醇/乙酸會使蛋白質固定在聚丙烯酰胺凝膠上，會大大降低從凝膠電轉移到膜上的蛋白量。 2.加入足以浸沒凝膠的轉移緩沖液，在室溫放置 5~lOmin。 3.根據凝膠大小剪一塊 PVDF 膜，用 100% 甲醇潤濕后迅速轉移到一個內有轉移緩沖液的塑料容器中，在室溫下浸泡膜 5 min。 4.將凝膠和膜都從轉移緩沖液中取出，按照儀器要求組裝到電印跡裝置里。 5.凝膠在 4°C 條件下，500mA 電轉移 3 h。注意參照儀器所要求的特殊條件。例如，對一些儀器的特殊要求如下： 若使用 Mini Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell(Bio-Rad):90~100V 轉移 Ih 或 30V 保持過夜。 若使用 Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell(Bio-Rad): 轉移時間依賴于凝膠濃度和膜的大小，可以從 30 min~4 h。在 4℃時，如使用 Gly-Tris 緩沖液，100V 對應的電流約 360mA，150V 對應的電流約 550mA，200V 對應的電流約 850mA。 6.按方案 3 檢測膜上的蛋白質。
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