這種方法是在280 nm波長,直接測試蛋白。選擇 Warburg公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。
蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除 320
nm的“背景”信息,設定此功能“開”。與測試核酸類似,要求 A 280 的吸光值至少大于 0.1A,最佳的線性范圍在 1.0-1.5
之間。實驗中選擇 Warburg 公式顯示樣品濃度時,發現讀數“漂移”。這是一個正常的現象。事實上,只要觀察A 280 的吸光值的變化范圍不超過
1%,表明結果非常穩定。
漂移的原因是因為 Warburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數,只要吸光值有少許改變,濃度就會被放大,從而顯得結果很不穩定。
蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如 DNA 的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。