蛋白質除鹽的方法有哪些?如何做能夠在除鹽的過程中不過分的稀釋蛋白質?
答題思路:
首先,當遇到分離純化題目的時候,我們腦海中先歸納出分離純化的各種方法以及依據。
根據分子大小不同:透析、超過濾、密度梯度離心、凝膠過濾、SDS-PAGE凝膠電泳。
根據溶解度差別:等電點沉淀、鹽溶、鹽析、有機溶劑分離沉淀。
根據電荷不同:各種電泳、離子交換層析
選擇性吸附和利用對配體特異親和力的純法方法:親和層析。
顯然,蛋白質脫鹽,是將蛋白質與小分子物質分開。上面的方法中,根據溶解度差別這幾種方法還得加鹽,與脫鹽的目的背道而馳。這里面的等電點沉淀能不能行呢?如果原先蛋白質溶液中沒有鹽,那么我們將pH調整到某個蛋白質等電點,這種蛋白質就可能沉淀下來這時候肯定沒有加鹽。但是我們現在的體系中是有鹽離子的,我們把鹽析下來的蛋白質先加少量水溶解出來,這個時候我覺得因為溶液里有鹽離子,溶劑的極性比較高,有一定鹽溶的效果,所以等電點沉淀并不容易實現。
根據電荷的方法也不應該考慮,因為鹽和蛋白質都是帶電荷的,不好分離。
應該重點考慮根據分子大小不同的純化方法。
透析能夠分離蛋白質與離子,但是透析的過程中透析液會進入蛋白樣品中,造成蛋白質的稀釋。
凝膠過濾我們設置凝膠顆粒空隙小于蛋白質直徑,這樣蛋白質不經過凝膠內部首先被洗脫下來,而離子則進入凝膠顆粒內部。但是在洗脫的過程中蛋白質樣品必然會被洗脫液稀釋