蛋白酶的種類繁多，不同的蛋白酶的性質和催化反應條件各不相同，無法規定一個統一的測定方法，目前使用最多的有福林—酚法、紫外分光光度法、甲醛滴定法、DHT-酪蛋白法。
1 福林酚法
蛋白酶催化蛋白質水解成氨基酸，其中含酚基的氨基酸（色氨酸、酪氨酸）與福林試劑反應，生成藍色復合物，藍色深淺與含酚基氨基酸的多少成正比，以此來測定酶的活力。
2 甲醛滴定法
蛋白酶催化蛋白質水解成氨基酸，再用甲醛固定氨基酸的氨基，用0.1mol/LNaOH溶液滴定生成的氨基酸，從而測定其酶活。
3 DHT-酪蛋白法
用5-氨基四唑重氮鹽將酪氨酸中部分組氨酸和酪氨酸重氮化，得到黃色的重氮5-氨基四唑酪蛋白（DHT-酪蛋白）。以DHT-酪蛋白為底物，在蛋白酶作用下，水解生成DHT-肽，二價離子可與DHT-蛋白與DHT-肽形成穩定的可溶性紅色螯合物，而鋅離子可迅速沉淀DHT-酪蛋白，但不沉淀DHT-肽。選用合適濃度的鋅離子和鎳離子作為沉淀劑和顯色劑，利用比色法可測定蛋白酶活力。
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