融合蛋白的免疫篩選實驗——IPTG法

用抗體篩選λgt11 cDNA文庫時，可待噬斑長到一定裎度方可誘導表達融合蛋白，篩選到陽性克隆的成功概率就可能大大增加。噬菌體生長3~4 h 后，將含誘導劑IPTG的濾膜放入噬斑平板，即可誘導β-半乳糖苷酶-cDNA融合蛋白的表達，繼續在37℃培養，然后按基本方案用抗體對影印濾膜進行篩選。

大腸桿菌

IPTG

培養箱牙簽硝酸纖維素膜

1.  用1×10⁴~5×10⁴融合有cDNA的λ噬菌體感染0.5~1.0 ml 過夜培養的Y1090新鮮菌懸液。

2.  加入預熱到47℃的7 ml 頂層瓊脂中，鋪150 mm LB平板，42℃培養3.5 h。

3.  將132 mm 直徑的硝酸纖維素濾膜故入10 mmol/l IPTG溶液中浸泡后，取出干燥。

4.  再將含IPTG的濾膜放入噬菌體文庫平板中，37℃培養3.5 h。

5.  每張濾膜作好標記后取出，封閉濾膜上的剩余的蛋白結合位點并進行雜交檢測。