融合蛋白的方法改進

  自從20世紀70年代中期融合標簽技術出現以來，親和標簽已成為一種重組蛋白純化十分有效的工具，具有結合特異性高、純化條件溫和、純化步驟簡便、適用性廣泛等顯著優勢。通常，親和標簽定義為對特定的生物或化學配基具有高度親和力的一段氨基酸序列，可以分成很多類，其中一個常用的小分子短肽標簽是FLAG標簽。
 
    通常，FLAG標簽系統使用合成的FLAG短肽在非變性條件下進行融合蛋白的洗脫，從而保證了融合蛋白的生物活性。然而，FLAG短肽合成成本較高，不適用于大規模純化，且需要額外步驟除去結合在層析介質上的短肽。
 
方法改進：

為此，我們進行了以下改進：

（1）改用精氨酸在偏酸條件下進行FLAG融合蛋白的洗脫，不僅純化*，而且大大降低了純化成本，簡化了純化步驟。

（2）結合一個接頭結構的3*FLAG標簽，這種標簽天然親水，因而不會改變融合蛋白的功能，遮蓋融合蛋白的其他表位，或者降低融合蛋白的可溶性，尤其合適于某些需要維持生物活性的小分子目標蛋白。