實驗方法原理
實驗材料 1 mg／ml 融合蛋白
試劑、試劑盒 200 μg Xa 因子／ml 反應緩沖液2 × SDS 樣品緩沖液
儀器、耗材 沸水浴
實驗步驟
準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間。
反應 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白
反應 2:5 μl 不含 Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白（模擬消化）室溫下反應。
2. 分別在 2、4、8 和 24 h 取出 5 μl 反應液，加 2 × SDS 樣品緩沖液 5μl ，-20℃ 下凍存。
3. 在 24 h 時，將 5 μl 反應 2 （模擬消化）液與 5 μl 2 × SDS 樣品緩沖液混合。
4. 將 5 μl 原始融合蛋白溶液與 5 μl 2 × SDS 樣品緩沖液混合（未裂解對照）。
5. 將所有樣品于沸水浴中加熱 10 min，加樣到 SDS-聚丙烯酰胺凝膠上電泳，根據裂解程度確定適當的溫育時間。如果僅出現明顯的部分裂解，應增加酶的用量和（或）延長溫育反應時間。如未發生裂解，則依據輔助方案進行。
6. 確定了適當的裂解條件后，將余下的融合蛋白樣本按比例擴大反應，僅留小量的未裂解融合蛋白作對照用。以 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳監測裂解程度。
注意事項
經谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠純化的融合蛋白，可在 PBS 緩沖液中進行 Xa 因子消化。或者將蛋白質溶解在 20 mmol/L Tris ? Cl（pH 8.0）/ 1mmol/L CaCl2/ 100mmol/L NaCl 中。盡管大多數融合蛋白可保存于 4℃，但直至步驟 6，應將其保存在 10% 甘油中于 -70℃ 下儲存。