1. 在20或50 ml 帶球旋蓋的試管中，用20倍體積含1%Triton X-100的PBS液洗滌結合在谷胱甘肽-瓊脂糖珠的GST融合蛋白。室溫下，在臺式離心機上以500 g 離心10 s 沉淀瓊脂糖珠，小心棄上清，將谷胱甘肽-瓊脂糖珠重懸于20倍體積的Triton X-100緩沖液中，重復洗滌1次。
2. 第二次離心后，小心棄上清，用20倍體積的GST洗滌緩沖液重懸谷胱甘肽-瓊脂糖珠。
3. 離心沉淀并棄去上清，將谷胱甘肽-瓊脂糖珠重懸于20倍體積的凝血酶裂解緩沖液中，重復離心并再重懸于≤1 ml 的凝血酶裂解緩沖液中。
4. 取出一小份重懸的瓊脂糖珠，在其中加入等體積的2×SDS樣品緩沖液，-20℃貯存以備SDS-PAGE分析用。
5. 將凝血酶以1%的比例加入剩余的谷胱甘肽-瓊脂糖珠混懸液，25℃下保溫反應1 h。
6. 用1柱床體枳的GST洗滌緩沖液洗脫已裂解釋放的蛋白，如步驟1所述離心沉淀谷胱甘肽-瓊脂糖珠，收集上清，重復5次，但分開保存毎次洗滌后的餾分，各取20 μl 用于SDS-PAGE。
7. 用GST冼脫緩沖液替換洗滌緩沖液，重復步驟6。洗脫與介質結合的GST。從毎個級分中取出20 μl 用于SDS-PAGE分析，以確定裂解程度，此膠上應包括步驟4留存的樣品。 展開 | 