實驗概要
本實驗用EGTA可將C1q螯合、沉淀。該法簡便易行,且所需設備簡單。
主要試劑
1. 0.026mol/L EGTA(ethylene glycolbisαaminoethyltetraacetic acid)溶液,pH值7.5;
2. 醋酸鹽緩沖液,pH值7.0、0.02mol/L,含有0.75mol/L NaCl和0.01mol/LEDTA;
3. pH值5.0、0.06mol/L EDTA;
4. pH值5.0、0.005mol/L PB,含0.75mol/L NaCl和0.01mol/L EDTA;
5. pH值7.5、0.035mol/L EDTA;
6. pH值7.5、0.02mol/L PB,含0.75mol/L NaCl和0.01mol/L EDTA。
主要設備
電導儀;離心機
實驗步驟
1. 收集血清,在冷的pH值7.6、0.026mol/L EDTA溶液中透析4h,然后另換新緩沖液透析11h;
2. 收集沉淀,用以上緩沖液洗一次,然后將沉淀物溶于32ml pH值5.0、0.02mol/L醋酸鹽緩沖液中;
3. 將以上配制的溶液用4000ml pH值5.0、0.06mol/L EDTA(電導率相當于0.065mol/L NaCl),于冷環境下,再透析4h,收集沉淀再洗一次,將沉淀溶解于32ml pH值7.5、0.005mol/L PB中,離心使之澄清;
4. 用pH值7.5、0.035mol/L EDTA冷透析5h,使C1q再沉淀,收集沉淀,洗滌后溶解在16ml pH值7.5、0.02mol/L PB中,即為C1q蛋白溶液,分裝,保存。