實驗室安全保證
為了將實驗室人員的損傷或實驗室獲得性感染的風險最小化,應按如下要求進行:
1. 洗手:手或其他皮膚表面在直接接觸血液或任何潛在傳染性物質后,必須立即清洗。脫掉手套之后,完成工作后,離開實驗室或進入實驗室潔凈區時都必須洗手。
2. 防護屏障:在采集血樣本時必須戴手套,而且在接觸不同的病人時都應換手套。一旦手套被污染或損壞時必須立刻更換。在實驗室標本接收和處理區域,分枝桿菌實驗室以及在其他手可能接觸到感染性物質或污染表面的區域時,也應戴手套。當處理和處置生物危害性廢物時都應戴手套。必要的時候戴面罩、防護眼罩和穿隔離衣。
3. 生物安全柜:實驗室某些操作可形成小飛沫或氣溶膠,故應在ⅡA或ⅡB級的生物安全柜中操作。
4. 消毒和滅菌:實驗室應建立標準化處理污染物的操作規程,所有的樣本應消毒和滅菌以后再運輸出實驗室,并保證運輸過程中的生物安全性。
5. 人員培訓和實驗室事故管理:實驗室工作人員必須定期接受標準防護知識的培訓和再培訓,有能力處理工作當中各種危險因素,預防事故發生,將接觸污染物的危險性降至最低;或者在一旦發生偶發接觸時,能夠正確處置,將暴露時間降至最低。實驗室應該建立暴露于潛在感染性物質時人員管理方面的詳細操作規程。
血培養的質量控制
一、分析前質量控制
包括:患者評估、檢測項目的選擇和申請、樣本采集、樣本運送、樣本接收和處理。
(一)血培養標準操作規程(Standard operation procedure,SOP)的制定和培訓
實驗室應與臨床醫護人員共同制定血培養的SOP文件,并持續培訓 ,以確保臨床醫護人員能正確應用、采集、保存、運送血培養標本。血培養標準操作規程應包括: 采血指征;采血時機;采血標準流程,包括采血部位、皮膚消毒方法、預防污染措施、采血次數與采血量等內容;標本的保存、運送要求;血培養結果報告及其臨床價值分析規則等。
(二)患者評估
血培養可提供重要信息,影響患者治療或(和)預后,因此,實驗室應制定適合指南,明確血培養采集的臨床指征;同時還應確定對菌血癥或真菌血癥發生率低的臨床病例不推薦進行血培養。
(三)檢驗項目的選擇和申請
所有臨床醫生應知曉何時進行血培養;實驗室必須確認臨床醫生已熟練而準確的完成了相關的紙質或電子申請表。所有關鍵信息必須以易讀的形式包含在申請中,應包括但不限于:明確的患者標識,明確的臨床醫生申請項目的標識,標本類型,具體檢查要求,患者的診斷以及相關臨床信息。
(四)標本采集
實驗室應制定血培養標本采集指南。并對采血者提供培訓。血培養標本采集應在使用抗菌藥物之前,按要求采集至少2次(2個不同部位),采集足夠的量(成人每瓶不少于5毫升,兒童不少于2毫升),并嚴格執行無菌操作規程。
(五)標本運送
血培養標本必需盡快運送到實驗室,在運輸過程中必需保證標本的完整性,運輸符合生物安全法規。血培養標本采集后常溫放置,推薦于兩小時內運輸到實驗室。
(六)標本接收和處理
實驗室應制定血培養標本的驗收規程,包括評估是否可被接收、拒收標準、實驗室接收記錄和處理流程等。
二、分析中質量控制
根據相關法律法規文件,實驗室必需制定以下檢測項目的SOP:血培養微生物檢測的步驟; 菌株鑒定及相關藥敏要求;結果準確性的確認以及結果的解讀i;初級報告與最終報告的符合情況,不符合結果的分析、確認以及與臨床溝通。
實驗室應定期審閱危急值報告相關記錄,是否能在1小時內將重要結果通知臨床相關醫護人員。
三、分析后質量控制
包括結果報告、標本和記錄的管理、咨詢。
(一)結果報告
血培養的報告在發出前必須核對,雙人雙簽;報告需使用清晰、標準的術語以減少被錯誤解釋的幾率。
實驗室應定期與臨床溝通以發現可以改進的機會,旨在提高血培養質量,記錄和評估干預的有效性。
(二)標本和記錄管理
包括陽性培養瓶的儲存和保存時間、血培養瓶的銷毀記錄、記錄的保存要求等。
(三)咨詢
實驗室應能根據不同的臨床情況與臨床醫護人員進行血培養的結果解釋和討論,提供進行其他檢測以幫助血培養結果準確解釋的信息和建議以及回答臨床醫生的疑問。
血培養相關注釋
a: 對懷疑菌血癥、真菌血癥的患者,在考慮使用抗菌藥物之前,應立即或者在短時間內采集血培養標本。在不同的時間點間隔性采血只有以下情況才有必要:疑似感染性心內膜炎或其他血管內(如導管相關性感染)感染患者的持續性菌血癥。
b: 成年人的單瓶血培養結果不可信,因為采血量不足,從而使培養陽性率降低或結果難以解釋。血培養不必在二至五天內進行重復,因為在抗生素治療開始后血液中的細菌不會立即清除。研究表明,只做1套血培養,病原菌的檢出率僅為65%,兩套血培養為80%,三套血培養為96%。
c: 厭氧瓶則用于患兒母親有以下高危險因素時的新生兒患者:分娩時延遲破膜、絨毛膜羊膜炎、慢性口或鼻竇感染、蜂窩織炎(尤其是肛周和骶周)、腹部癥狀、咬傷、膿毒性靜脈炎及類固醇激素治療導致的中性粒細胞減少。
d: 有兩種例外情況可復查或連續監測血培養:第一是感染性心內膜炎患者,對于他們的菌血癥或真菌血癥是否被清除可用于評估和指導治療;第二是與感染性心內膜炎無關的金黃色葡萄球菌菌血癥,在48至96小時血培養再次陽性,可以有力地預測復雜性金黃色葡萄球菌菌血癥。
e: 采用一個需氧瓶和一個厭氧瓶的血培養組合與采用兩瓶需氧瓶的培養相比,可檢出更多的葡萄球菌、腸桿菌科細菌和厭氧菌。真菌和嚴格的需氧菌(如假單胞菌屬和窄食單胞菌屬)幾乎全部只能從需氧瓶中分離到。
f:自動化血培養系統的標準孵育時間為5天,包括布魯菌、嗜血桿菌、放線菌、人類心桿菌屬、嚙蝕艾肯菌、金桿菌屬以及營養變異鏈球菌等的孵育時間都是5天。有研究表明,95%-97%的有臨床價值的細菌會在3-4天內被自動血培養系統檢出,目前仍然推薦5天的培養周期。特殊情況可適當延長培養時間,如臨床懷疑布魯氏菌感染,可延長培養至28天,懷疑軍團菌感染,可延長培養至10天等。
g: Maki半定量法是先用75%酒精清潔導管周圍皮膚,然后無菌移動導管,剪取導管末端125px置于無菌容器中,立即送至實驗室(為防止干燥,常規培養送檢時間不得超過15min,4℃保存不得超過2小時)。實驗室人員用無菌鑷子將導管在血瓊脂平板上交叉滾動4次,然后棄之,將接種后的培養基置CO2孵箱35℃過夜培養,平板上菌落數不少于15個為陽性。
h: 對疑似亞急性感染性心內膜炎的患者,不一定必須在經驗性抗生素治療前采血培養,對這些患者,更重要的是建立微生物學診斷。由于大多數感染性心內膜炎患者菌血癥持續存在,使血培養的時間選擇相對不是那么重要。
i: 查閱其他一些臨床和實驗室信息記錄,有可能幫助準確的解釋血培養結果,避免假陽性及假陰性,比如血培養的數量、采血培養前是否已經使用抗菌藥物、WBC增多、其他感染部位的陽性培養結果、免疫抑制的類型和嚴重程度、常規血培養無法檢測到的苛養菌引起的感染或常規方法無法發現的苛養菌生長導致的血培養陽性等。
(三)咨詢
實驗室應能根據不同的臨床情況與臨床醫護人員進行血培養的結果解釋和討論,提供進行其他檢測以幫助血培養結果準確解釋的信息和建議以及回答臨床醫生的疑問。
血培養相關專業術語
1.自動化血培養系統:一種使用機械化系統來孵育、振搖和監測血培養瓶中的細菌生長狀況的血培養系統。
2.菌血癥:血流中存在細菌;注意:從血中分離的細菌可能造成敗血癥,也有可能并非敗血癥的原因而是污染菌。
3.血流感染:與菌血癥或真菌血癥相關的感染。
4.污染菌:從血培養分離的,在標本采集或處理時被帶入的,對病人并不致病的微生物(比如,采集血液作培養時并未出現在病人血液中的菌株)。
5.培養基:用來培養微生物使其生長的物質或制劑。
6.消毒劑:用于減少表面細菌、真菌或病毒數量的物質。
7.假陽性:當疾病或某種情況不存在時出現的陽性測試結果;注意:對血培養而言,(1)一份培養分離的菌株不能確定為敗血癥的原因;(2)一份培養具有微生物生長的客觀證據(如儀器提示微生物生長)然而其次代培養物及染色均為陰性。
8.真菌血癥:血流中存在真菌(酵母菌或霉菌)。
9.敗血癥:全身性炎性反應綜合癥加感染。
10.次代培養:從其他培養物如血培養瓶中的血-肉湯混合物獲得的材料而進行的細菌或真菌培養,或者從先前的轉運培養基中轉接種微生物至一個新的培養基而進行的培養;它是一種延長特殊菌種的方法,由于舊的培養物有趨于退化的趨勢。
11.碘酊:碘和碘化鉀的醇溶液,被用作消毒皮膚的制劑。
血培養的污染問題
為了將血培養污染最小化,每個實驗室應具有以下措施:注重血培養標本采集技術的培訓,減少污染的發生;采集合適的血培養套數以便有效檢出病原微生物;結合醫院血培養開展狀況,建立污染菌判斷標準化程序。通常血培養可接受的污染率(污染的血培養套數/血培養總套數×100%)是≤3%。
污染導致的血培養假陽性是一個較為普遍的問題,即使采用最好的血培養標本采集方法也很難將污染率降至2%以下。血培養假陽性結果將導致不必要的抗生素治療,延長住院時間,增加患者負擔和細菌耐藥性的選擇性壓力。準確辨別污染能極大減少相應的花費,并有利于降低污染率。但就目前來說,判斷血培養污染的金標準并不存在。血培養污染的鑒別主要依靠以下幾個方面:微生物鑒定、陽性檢出時間、重復培養結果以及臨床特征等。
微生物菌種鑒定對判斷血培養污染的價值:當分離出的微生物為金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌以及其他腸桿菌科細菌、銅綠假單胞菌、白色假絲酵母菌時,90%以上是血流感染病原菌。分離出化膿性鏈球菌、無乳鏈球菌、產單核李斯特菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌、脆弱擬桿菌、其它假絲酵母菌和新型隱球菌時污染的可能性更低。相反,棒狀桿菌、微球菌、芽胞桿菌、丙酸桿菌、草綠色鏈球菌和凝固酶陰性葡萄球菌(Coagulase negative staphylococci, CNS)等很少是菌血癥的病原菌。但是CNS既是最常見的污染菌,也是現在常見的菌血癥病原菌之一,其臨床意義的判定仍是一個世界性難題,需要臨床醫生和實驗室人員相互溝通,綜合分析。
血培養陽性瓶數量對判斷血培養污染的價值:心內膜炎或血流感染患者所有或大部分血培養瓶為陽性,相反,血培養污染經常只有一瓶為陽性,這是血培養操作指南中推薦血培養應兩套四瓶(雙瓶雙側)的一個重要原因:Richter等研究表明:潛在的污染菌往往是從一套血培養中的一瓶或兩瓶中分離得到的,如果不進行第二次第二套血培養作為比較的話,實際上不大可能對可疑的污染菌株進行區分。因此,對于一個從一套或者一瓶血培養中分離到的低致病性菌株,我們對其評價只能限于一定的程度,即通過鑒定排除是臨床意義的菌株還是污染菌。對于那些可疑的污染菌不應該進行藥物敏感性試驗。在同一病人的血培養中多次發現同一細菌,在保證細菌鑒定的前提,以初始分離菌株的藥敏試驗為準。
鑒別血培養污染的另一個工具是系統陽性報警時間,前提是病原菌被檢測生長的時間要早于污染菌,但實際上兩者之間存在交叉,尤其是隨著全自動血培養系統的應用,污染菌檢測生長時間變短,病原菌與污染菌系統陽性報警時間的差別變得更窄,其鑒別價值也就變得更加模糊。
總之,目前血培養污染的判斷仍缺少獨立的金標準,只有通過臨床醫護人員與實驗室的不斷溝通,才能一方面減少將污染菌當作病原菌的機率,另一方面也宣傳了正確的血培養采集、處理方法,進一步減少了污染發生的可能,形成良性循環,才能最大限度的減少血培養污染的發生及其對臨床診治的干擾。