一、試劑盒組成、貯存、穩定性
1. 說明書，耗材：DNA 制備管、中量濾器、連接管。
2. Buffer VL：細胞和病毒裂解液，室溫密閉貯存。
3. Buffer G-B：蛋白沉淀液，室溫密閉貯存。
4. Buffer DV-A：Buffer DV 的制備液。請參照實驗準備Buffer DV 的配制方法配制，室溫密閉貯存。
5. Buffer DV：相分離液，室溫密閉貯存。
6. Buffer BV：DNA 結合液，室溫密閉貯存。
7. Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。
8. Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇，混合均勻，室溫密閉貯存。可用100%乙醇或95%乙醇。
9. Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室溫密閉貯存。 二、實驗準備
1. 第一次使用時，在Buffer W2 concentrate 中按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
2. 準備無核酸和核酸酶污染的Tip 頭、離心管。
3. 制備Buffer DV：取4 ml Buffer DV-A 250 ml 異丙醇，150 ml 異丁醇，加入提供的500 ml 試劑瓶中，混合均勻。
4. 4℃預冷Buffer DV。
三、實驗步驟
【DNA 釋放 】
1. 將5 ml 抗凝全血置于一50 ml 離心管中，若全血樣本體積不足5 ml，用PBS 補充至5 ml。
2. 加入10 ml Buffer VL，蓋緊離心管帽，旋渦振蕩1 min。
3. 加入10 ml Buffer G-B，再次蓋緊離心管帽，立刻上下混勻。
【兩相分離去除蛋白和其它雜質】
4. 加入20 ml Buffer DV（4℃預冷），用力混合均勻。≥5 000xg 離心5 min。
* 請在實驗前按照第一頁準備Buffer DV。
5. 盡可能丟棄上相，保留相間沉淀和下相。加入20 ml 4℃預冷Buffer DV，用力混合，≥5 000xg離心5min。
【基因組DNA 的純化】
6. 丟棄上相，將下相轉移至中量濾器中（濾器置于另一50 ml 離心管中），將活塞插入注射器，緩慢推動活塞，收集50 ml 離心管中的濾液。
* 上相必須完全棄盡。
7. 棄濾器，在濾液中加入10 ml Buffer BV，混合均勻。
8. 將DNA 大量制備管插到負壓裝置的插口上，將步驟7 的混合液移到制備管中，開啟并調節負壓裝置至-20-30 英寸汞柱。
9. 待步驟8 管中液體都吸盡后，加入15 ml Buffer W1，吸盡管中液體，保持負壓。
10. 加入20 ml 已加入乙醇的Buffer W2，吸盡管中液體，關閉負壓裝置。
* 確認在Buffer W2 concentrate 中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
11. 將大量制備管從負壓裝置轉移至另一潔凈的50 ml 離心管中，≥6 000xg 離心5 min。
12. 將大量制備管插回到負壓裝置的插口上，保持負壓5 min，吸盡殘存的Buffer W2。
13. 將大量制備管置于另一潔凈的50 ml 離心管中，在silica 膜中央加1.5 ml Eluent 或去離子水，室溫靜置5 min，≥6 000xg 離心5 min 洗脫DNA。
* 將去離子水或Eluent 加熱至65℃將提高洗脫效率。
14. 可選步驟：同樣方法，在silica 膜中央加0.75 ml Eluent 或去離子水，室溫靜置1 min，≥6 000xg 離心5 min 洗脫DNA。 收起 | 