血塞通滴丸中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1含量的高效液相色譜測定
血塞通滴丸為血塞通的新劑型,其主要成分為人參皂苷Rg1,三七皂苷R1。本實驗采用高效液相色譜法測定血塞通滴丸中人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量。
1、儀器與試藥
SSI公司PC-3000高效液相色譜儀,熱電300紫外分光光度計,人參皂苷Rg1,三七皂苷R1對照品(中國藥品生物制品檢定所),血塞通滴丸(批號:20080409,20080401,20080402)本所自制。甲醇為色譜純,水為純化水。
2、方法與結果
2.1檢測波長確定稱取人參皂苷Rg1,三七皂苷R1對照品適量,用甲醇配制成20μg·ml-1的溶液,在200~300nm波長處掃描,結果人參皂苷Rg1,三七皂苷R1均在203nm波長處有最大吸收。
2.2色譜條件色譜柱為島津KromasilC18(4.6mm×625px);流動相為甲醇-水(58∶42);流速為1.0ml·min-1,檢測波長為203nm;理論板數按人參皂苷Rg1,三七皂苷R1峰計算不低于10000,分離度大于2.0。
2.3含量測定
2.3.1標準曲線的繪制
人參皂苷Rg1:精密稱定人參皂苷Rg1對照品約60mg,置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取1.0,3.0,5.0,7.0,9.0,10.0ml分別置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。按上述色譜條件分別取10μl注入色譜儀,測定。結果表明人參皂苷Rg1在濃度0.116~1.160mg·ml-1范圍內與峰面積呈良好線性關系,其回歸方程Y=-99466+3257868X,r=0.9992。
三七皂苷R1:精密稱定三七皂苷R1對照品約60mg,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0ml分別置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。按上述色譜條件分別取10μl注入色譜儀,測定。結果表明三七皂苷R1在濃度0.232~0.812mg·ml-1范圍內與峰面積呈良好線性關系,其回歸方程Y=11772+2495523X,r=0.9987。
2.3.2重復性與穩定性試驗取標準曲線測定中心濃度點連續進樣6次,量取峰面積計算RSD分別為人參皂苷Rg11.11%,三七皂苷R11.09%,重現性良好,可準確用于含量測定。該溶液放置6h后重復進樣,峰面積基本不變,RSD分別為1.05%和0.99%。
2.3.3精密度測定取樣品6份,精密稱定,按樣品含量測定方法測定RSD為2.5%。
2.3.4加樣回收率測定取血塞通滴丸10粒,精密稱定,置25ml量瓶中,加甲醇適量,超聲10min使溶解,放冷,加甲醇至刻度,搖勻。精密量取5.0ml置10ml量瓶中,精密加入人參皂苷Rg1,三七皂苷R1對照品適量,加甲醇至刻度,搖勻。按上述色譜條件分別取10μl注入色譜儀,測定。
2.3.5樣品測定取血塞通滴丸10粒,精密稱定,置25ml量瓶中,加甲醇適量,超聲10min使溶解,放冷,加甲醇至刻度,搖勻。按上述色譜條件分別取10μl注入色譜儀,測定。
2.3.6血塞通原料測定精密稱取血塞通原料約100mg,置25ml量瓶中,加甲醇適量,超聲10min使溶解,放冷,加甲醇至刻度,搖勻。按上述色譜條件分別取10μl注入色譜儀,測定。
3、討論
血塞通滴丸的輔料為聚乙二醇6000。經測試聚乙二醇6000的甲醇溶液無紫外吸收峰,對樣品的測定無干擾。本方法簡便、準確,可作為控制血塞通滴丸中人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量測定方法。