1. 電流法
電流法利用纖維蛋白原無導電性而纖維蛋白具有導電性的特點,將待測樣品作為電路的一部分,根據凝血過程中電路電流的變化來判斷纖維蛋白的形成。
由于該電流法的不可靠性及單一性,很快被更靈敏、更易擴展的光學法所淘汰。
2. 光學法(比濁法)
光學式血凝儀是根據凝固過程中濁度的變化來測定凝血的。根據不同的光學測量原理,又可分為散射比濁法和透射比濁法兩類。
(1)散射比濁法:散射比濁法是根據待驗樣品在凝固過程中散射光的變化來確定檢測終點的。在該方法中檢測通道的單色光源與光探測器呈90°直角,當向樣品中加入凝血激活劑后,隨著樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程,樣品的散射光強度逐步增加,儀器把這種光學變化描繪成凝固曲線,當樣品完全凝固以后,散射光的強度不再變化。通常是把凝固的起始點作為0%,凝固終點作為100%,把50%作為凝固時間。光探測器接收這一光的變化,將其轉化為電信號,經過放大再被傳送到監測器上進行處理,描出凝固曲線。當測定含有干擾物(高脂血癥、黃疸和溶血)或低纖維蛋白原血癥的特殊樣本時,由于本底濁度的存在,其作為起始點0%的基線會隨之上移或下移,儀器在數據處理過程中用本底扣除的方法來減少了這類標本對測定的影響。但是這是以犧牲有效信號的動態范圍為代價的,對于高濁度標本并不能有效解決問題。
(2)透射比濁法:透射比濁法是根據待測樣品在凝固過程中吸光度的變化來確定凝固終點。與散射比濁法不同的是該方法的光路同一般的比色法一樣呈直線安排:來自光源的光線經過處理后變成平行光,透過待測樣品后照射到光電管變成電信號,經過放大后在監測器處理。當向樣品中加入凝血激活劑后,開始的吸光度非常弱,隨著反應管中纖維蛋白凝塊的形成,標本吸光度也逐漸增強,當凝塊完全形成后,吸光度趨于恒定。血凝儀可以自動描記吸光度的變化并繪制曲線,設定其中某一點對應的時間為凝固時間。
就濁度測量原理而言,散射比濁法更為合理、準確。在這類儀器中,光源、樣品、接收器成直角排列,接收器得到的完全是濁度測量所需的散射光。
而在透射比濁法中,光源、樣品、接收器成一直線排列,接收器得到的是很強的透射光和較弱的散射光,前者是有效成份,后者應扣除,所以要進行信號校正,并按經驗公式換算到散射濁度。此法雖儀器簡單,但精度較差。