一、血液生理概要
要點1：
離體后的血液自然凝固，分離出來的淡黃色透明液體稱為血清。血液加抗凝劑后分離出來的淡黃色液體稱為血漿。血清與血漿差別是：血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纖維蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。
要點2：
全血適用于臨床血液學檢查，如血細胞計數、分類和形態學檢查等。血漿適用于血漿生理性和病理性化學成分的測定，特別是內分泌激素測定；血漿除鈣離子外，含有其他全部凝血因子，也適用于血栓與止血的檢查。血清適用于臨床化學和臨床免疫學檢查。
要點3：
正常人血量約為（70±10）ml／kg體重，成人約4～5L，約占體重的6%～8%，其中血漿占55%，血細胞占45%。小兒血量與體重之比略高于成人，男性比女性血量稍多，但女性妊娠期間血量可增加23%～25%。
要點4：
血液的紅色來自紅細胞內血紅蛋白。動脈血氧合血紅蛋白含量較高，呈鮮紅色；靜脈血還原血紅蛋白含量高，呈暗紅色。嚴重貧血者血液紅色變淺。嚴重一氧化碳中毒或氰化物中毒者血液呈櫻紅色。
要點5：
酸堿度：正常人血液pH值7.35～7.45，動脈血pH值7.40，靜脈血pH值7.35。
血漿滲透量：正常人約為290～310mOsm／（kg·H20）。
要點6：
正常人血液中紅細胞呈均勻混懸狀態。與紅細胞膜表面的唾液酸根、正常血漿成分、血漿黏度及血流動力學等因素有關。
正常人全血黏度約為生理鹽水黏度的4～5倍，血漿黏度約為生理鹽水黏度的1.6倍。血液黏度與血細胞比容和血漿黏度有關，其中，血漿黏度受血漿中纖維蛋白原、球蛋白等大分子蛋白質的影響，它們的濃度越高，血漿黏度越高。
要點7：
血液生理功能具有運輸功能、協調功能、維護機體內環境穩定和防御功能。
二、采血方法
要點8：
靜脈采血多采用位于體表的淺靜脈，通常采用肘部靜脈、手背靜脈、內踝靜脈或股靜脈。小兒可采頸外靜脈血液。
要點9：
皮膚采血法曾稱為毛細血管采血法，是采集微動脈、微靜脈和毛細血管的混合血，同時含細胞間質和細胞內液。通常，選擇耳垂或手指部位。手指采血操作方便，檢查結果比較恒定，世界衛生組織（WHO）推薦采集左手無名指指端內側血液，嬰幼兒可采集大拇指或足跟內外側緣血液，嚴重燒傷患者，可選擇皮膚完整處采血。
要點10：
耳垂采血痛感較輕，操作方便，但血循環較差，受氣溫影響較大，檢查結果不夠恒定（如紅細胞、白細胞、血紅蛋白和血細胞比容等測定結果比手指血或靜脈血高），一般情況下不宜使用。
要點11：
因第1滴血混有組織液，應擦去。如血流不暢切勿用力擠壓，以免造成組織液混入，影響結果的準確性。
進行多項檢查時，采血的順序依次為血小板計數、紅細胞計數、血紅蛋白測定、白細胞計數、血型鑒定等。
要點12：
要點13：
1.皮膚采血：缺點是易于溶血、凝血、混入組織液，而且局部皮膚揉擦、針刺深度不一、個體皮膚厚度差異等都影響檢查結果，所以，皮膚采血檢查結果重復性差、準確性不好。
2.靜脈采血：開放式采血法的操作環節多，難于規范統一，在移液和丟棄注射器時可能造成血液污染。封閉式采血法的操作規范，有利于樣本收集運送和保存，防止院內血源性傳染病。
要點14：
質量控制
1.患者：患者活動情況、精神狀態、藥物、年齡、性別、種族、樣本采集時間、吸煙、季節等都會影響檢測結果。
2.采血：止血帶結扎時間應小于1min，如超過2min，大靜脈血流受阻而使毛細血管內壓增高，使分子質量＜5000的物質逸入組織液，或缺氧引起血液成分的變化，使檢查結果不可靠。
3.溶血：因容器不潔、接觸水、強力振蕩、操作不慎等可引起溶血，使紅細胞計數、血細胞比容、血漿或血清化學成分（如鉀、鎂、轉氨酶、膽紅素）等多項指標檢驗結果發生變化。
4.樣本處理：血液樣本采集后應立即送檢，并盡快進行檢查，樣本保存不當直接影響實驗結果。
5.實驗結果分析：分析結果時，應考慮藥物、飲食等因素對結果的影響。同時，應密切結合臨床。
三、抗凝劑選擇
要點15：
1.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽：常用有鈉鹽（EDTA-Na2·H20）或鉀鹽（EDTA-K2·2H2O），能與血液中鈣離子結合成螯合物，使Ca2＋失去凝血作用，阻止血液凝固。
EDTA鹽對血細胞形態、血小板計數影響很小，適用于血液學檢查，尤其是血小板計數。但鈉鹽溶解度低于鉀鹽，有時影響抗凝效果。根據國際血液學標準化委員會（ICSH）建議，CBC抗凝劑用EDTA-K2·2H2O，量為1.5～2.2mg／ml血液。不適于凝血檢查、血小板功能試驗。
2.草酸鹽：常用有草酸鈉、草酸鉀、草酸銨，溶解后解離的草酸根離子能與樣本中鈣離子形成草酸鈣沉淀，使Ca2＋失去凝血作用，阻止血液凝固。
草酸鹽優點是溶解度好、價廉。草酸鹽對凝血因子V的保護作用差，影響凝血酶原時間測定，而且草酸鹽與鈣結合后形成的沉淀物，影響自動凝血儀檢測結果，因此，草酸鹽不適于凝血檢查。
雙草酸鹽抗凝劑：草酸鉀可使紅細胞體積縮小，草酸銨則可使紅細胞脹大，兩者按適當比例混合，恰好不影響紅細胞形態和體積，可用于血細胞比容、CBC、網織紅細胞計數等項目檢查，若單用草酸鉀或草酸鈉作為抗凝劑，與肝素為抗凝劑測定的血細胞比容比較，測定結果可減低8%～13%。雙草酸鹽抗凝劑可使血小板聚集、影響白細胞形態，不適于血小板計數、白細胞分類計數。
3.肝素：加強抗凝血酶（AT）滅活絲氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，從而阻止血液凝固。肝素廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有組織和血管周圍肥大細胞和嗜堿性粒細胞顆粒中，帶有較多負電荷。肝素具有抗凝力強、不影響血細胞體積、不易溶血等優點，絕大多數檢查都可用肝素作為抗凝劑，是紅細胞滲透脆性試驗的理想抗凝劑。但肝素可引起白細胞聚集，瑞氏染色后產生藍色背景，不適于CBC、細胞形態學檢查。每毫升血液肝素用量為（15±2.5）U，多為肝素鈉鹽或鉀鹽。
4.枸櫞酸鹽：常用有枸櫞酸鈉，能與血液中鈣離子結合形成螯合物，阻止血液凝固。枸櫞酸鹽的溶解度低，抗凝力不如上述抗凝劑。枸櫞酸鈉與血液的抗凝比例為1：9或1：4。適用于紅細胞沉降率、凝血檢查，是輸血保養液的成分。
四、血液涂片制備
要點16：
手工推片法：取血1滴置載玻片一端，以邊緣平滑的推片，從血滴前方接觸血液，使血液沿推片散開，通常推片與載玻片保持25°～30°夾角，平穩地向前推動，血液即在載玻片上形成薄層血膜。涂片厚薄與血滴大小、推片與載玻片間夾角、推片速度、血細胞比容有關。
一張良好的血片，應厚薄適宜、頭體尾明顯、細胞分布均勻、血膜邊緣整齊，并留有一定空隙。
五、血液細胞染色
要點17：
瑞氏染料：由酸性染料伊紅（E－）和堿性染料亞甲藍（M＋）組成。將適量伊紅、美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅；二是固定細胞形態。
染色原理：既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質不同，對各種染料的親和力也不一樣。如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，與酸性染料伊紅結合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質；細胞核蛋白、淋巴細胞、嗜堿性粒細胞胞質為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質。
中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染淡紫紅色，稱為嗜中性物質；原始紅細胞、早幼紅細胞胞質、核仁含較多酸性物質，染成較濃厚的藍色；中幼紅細胞既含酸性物質，又含堿性物質，染成紅藍色或灰紅色；完全成熟紅細胞，酸性物質徹底消失后，染成粉紅色。
要點18：
pH值的影響：細胞各種成分均屬蛋白質，由于蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環境中正電荷增多，易與伊紅結合，紅細胞和嗜酸性粒細胞染色偏紅，細胞核呈淡藍色或不染色；在偏堿性環境中負電荷增多，易與美藍結合，所有細胞呈灰藍色，顆粒呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色。
稀釋染液必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致細胞染色反應呈色異常，形態難以識別，甚至錯誤。
要點19：
沖洗時應以流水沖洗，不能先倒掉染液，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久，以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用流水沖洗。
染色過淡可以復染，復染時應先加緩沖液，然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡，也可用甲醇脫色。
六、方法學評價
要點20：
血涂片制備：手工推片法用血量少、操作簡單，是應用最廣泛的方法。此外，瘧原蟲、微絲蚴等檢查可采用厚血膜涂片法。
瑞氏染色法是最經典、最常用的染色法，尤其對于細胞質成分、中性顆粒等可獲得很好的染色效果，但對細胞核的著色能力略差。吉姆薩染液對細胞核、寄生蟲（如瘧原蟲等）著色較好，結構更清晰，但對細胞質成分的著色能力略差。采用瑞氏-吉姆薩復合染液可使細胞胞質、顆粒、胞核等均獲得滿意的染色效果。
七、質量控制
要點21：
血涂片制備：制備涂片時，血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之則愈薄。血細胞比容增高、血液黏度較高時，應采用小血滴、小角度、慢推，可得滿意結果；血細胞比容減低、血液較稀時，應采用大血滴、大角度、快推。
血液細胞染色深淺與血涂片中細胞數量、血膜厚度、染色時間、染液濃度、pH值密切相關。