在ALT速率法測定中酶偶聯反應式為：
上述偶聯反應中，NADH的氧化速率與標本中酶活性呈正比，在340nm波長處，NADH呈現特征性吸收峰，而NAD則沒有。因此，可在340nm監測吸光度的下降速率（-△A/min），計算出ALT的活性單位。
（1）單試劑法：血清與（試劑成分完整的）底物溶液混合，ALT催化反應立即開始，在波長340nm，比色杯光徑1.0cm，37℃經90s延滯期后連續監測吸光度下降速率。根據線性反應期吸光度下降速率（-△A/min），計算出ALT活力單位。
（2）雙試劑法：血清與（缺少α-酮戊二酸的）底物溶液混合，37℃保溫5min，使樣品中所含的α-酮酸（如丙酮酸）引起的副反應進行完畢。然后，加入α-酮戊二酸啟動ALT的催化反應，在波長340nm處連續監測吸光度下降速率。根據線性反應期吸光度下降速率（-△A/min），計算出ALT活力單位。