（五）操作
1．直接測定法
在紫外分光光度計上，將未知的蛋白質溶液小心盛于石英比色皿中，以生理鹽水為對照，測得280nm 和260nm 兩種波長的吸光度。將280nm 及260nm 波長處測得的吸光度按下列公式計算蛋白質濃度。
C = 1.45A280 — 0.74A260
式中C：蛋白質質量濃度（mg/ml)；
A280nm：蛋白質溶液在280nm 處測得的吸光度；
A260nm：蛋白質溶液在260nm 處測得的吸光度。
本法對微量蛋白質的測定既快又方便，它還適用于硫酸銨或其他鹽類混雜的情況，這時用其他方法測定往往較困難。
為簡便起見對于混合蛋白質溶液，可用A280nm 乘以0.75 來代表其中蛋白質的大致含量（mg/ml）。
2．標準曲線法
1）標準曲線的繪制
取8 支干凈試管，編號，按下表加人試劑。
紫外吸收法測定蛋白質濃度 ― 標準曲線的繪制
加畢，混勻，用紫外分光光度計測A280，以吸光度為縱坐標，蛋白質濃度為橫坐標作圖。
2）樣液測定
取未知濃度的蛋白液 1.0ml，加蒸餾水3.0ml，測A280,對照標準曲線求得蛋白質濃度。
四、考馬斯亮藍結合法測定蛋白質濃度
（一）目的
學會用考馬斯亮藍結合法測定蛋白質濃度。
（二）原理
考馬斯亮藍能與蛋白質的疏水微區相結合，這種結合具有高敏感性。考馬斯亮藍G250的磷酸溶液呈棕紅色，最大吸收峰在465nm。當它與蛋白質結合形成復合物時呈藍色，其最大吸收峰改變為595nm，考馬斯亮藍G250
-蛋白質復合物的高消光效應導致了蛋白質定量測定的高敏感度。
在一定范圍內，考馬斯亮藍G250-蛋白質復合物呈色后，在595nm 下，吸光度與蛋白質含量呈線性關系，故可以用于蛋白質濃度的測定。
（三）實驗器材
1．旋渦混合器
2．試管
3．吸管 0.10ml、0.50ml、1.Oml、2.0ml、5.0ml
4. 722 型（或7220 型）分光光度計
5．容量瓶1000ml
6．量筒100ml
7．電子分析天平
（四）實驗試劑
1. 0.9% NaCI 溶液。
2．標準蛋白液：牛血清白蛋白（0.lmg / ml ) ，準確稱取牛血清白蛋白0.2g , 用0.9%NaCI 溶液溶解并稀釋至2000ml 。
3．染液：考馬斯亮藍 G250 ( 0.01% ) ，稱取0.19 考馬斯亮藍G250 溶于50ml 95％乙醇中，再加人l00ml
濃磷酸，然后加蒸餾水定容到1OOOml。4 ．樣品液：取牛血清白蛋白（0.lmg/ml）溶液，用0.9%NaCI 稀釋至一定濃度。
五、操作
1．標準曲線的制備
取7 支干凈試管，按下表進行編號并加入試劑。
混勻，室溫靜置3min ，以第l 管為空白，于波長595nm 處比色，讀取吸光度，以吸光度為縱坐標，各標準液濃度（ug/ml）作為橫坐標作圖得標準曲線。
2．樣液的測定
另取一支干凈試管，加人樣品液1.0ml 及考馬斯亮藍染液4.0 ml，混勻，室溫靜置3min，于波長595nm 處比色，讀取吸光度，由樣品液的吸光度查標準曲線即可求出含量。
注意：
樣品蛋白質含量應在10-100ug 為宜。一些陽離子如K＋、Na＋、Mg2＋、乙醇等物質對測定無影響，而大量的去污劑如SDS 等會嚴重干擾測定。