血清總膽固醇測定實驗

一、實驗試劑：

1、異丙醇

2、氧化鋁（層析用中型氧化鋁，用蒸餾水洗數次，傾去不易下沉的細顆粒，吸濾干后在110℃烘箱中活化至少8h，貯藏在密閉容器或干燥器內．

3、三氯化鐵貯存液：稱取FeCl3貯存液與濃硫酸（優級純）按1：1體積混合，室溫放置可穩定2個月左右．

4、顯色劑；1g/L（即0.18/dL Fecl貯存液與濃硫酸（優級純）按1：1體積混合，室溫放置可穩定2個月左右．

5、膽固目標準液：精確稱取膽固醇（純度99.5%以上）200mg，用異丙醇配成100ml存4℃冰箱內，臨用時達到室溫后才可吸取．

二、實驗操作：

l、吸取血清及標準液（或定值血清）20Oul，分別放入帶塞離心管中，向管底吸入異丙酸5.0ml，沖散血清，使蛋白沉淀成細顆粒，加塞混勻后放置6O℃水浴中1min，加入氧化鋁（或沸石合劑）1g加塞，將試管橫臥固定在震蕩器上振10min（也可用旋禍混合器或手搖）離心．

2、測定管及標準管中分別加入相應的上清液1ml，空白管加異內醇lml，放入60℃水浴中1min，分別沿管壁加入顯色劑3ml，充分混勻繼續放在60℃水浴中15min，然后置室溫冷卻后比色．

3、用光度計比色，波長530－550nm，以空白管校零點，讀取各管吸光度，用1cm比色杯時，線性范圍至少可達10.3mmol/L（400g/dL）．

三、計算：

血清膽固醇濃度＝測定管吸光度/標準管吸光度×標準液膽固醇濃度

1、Fe^3＋－磷酸－硫酸者頗多，但以本法測定顯色穩定，靈敏度比L－B反應高約5倍，但顯色反應的干擾因素多于L－B反應法．

2、本法可以同時測定甘油三脂和膽固醇．

3，抽提波與顯色劑混合時產生熱，發落程度與顯色深淺有關。故操作時應注意F列各點。

（l）同一批標本測定時需用同樣口徑及厚度的試管，為便于混合，試管口徑最好大些。

（2）沿管壁加人顯色劑，須與異丙醇抽提血清為兩層，然后迅速混合，不可邊加邊搖否則顯色不完全。

（3）顯色劑必須加一管混合一管，不可成比加完一起混合，混合后手法要一致。

4、所有試管和比色杯均須干燥，濃H2SO4必須優級純密閉保存防止吸水。

5、本法準確性接近ALBK法，回收率接近100%，重復性好，熟練操作者內CV＜1%天與天之間＜2%。